[發明專利]一株淀粉酶高產菌株及其改善低次等煙品質的方法

有效

• 申請號: 201110435707.1
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN102559548A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 王毅;魏云林;馬永凱;唐興宏;林連兵;季秀玲;劉敏
• 申請（專利權）人: 紅塔煙草（集團）有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/28;A24B15/20;C12R1/07
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 賽曉剛

技術領域

本發明涉及一株淀粉酶高產菌株，菌株保藏號是：CGMCC?No.5312，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路l號院3號，保藏日期2011年9月29日，并利用菌株發酵液對初烤煙葉進行處理的技術領域，具體說明了利用生物淀粉酶技術改善低次煙品質的技術方法。?

背景技術

煙葉發酵是改善煙葉品質的重要工序，未經發酵處理的煙葉不能直接用于卷煙生產，只有經過發酵處理，才可以不同程度地克服新煙和低次煙的不良品質因素，減少或消除新煙帶有的青色，減少刺激性和異味，使吸味和順，增加煙葉的彈性和燃燒性。煙葉發酵過程中微生物和酶起到非常重要的作用。?

微生物在煙葉發酵過程中的作用與酶促反應是密不可分的，因為微生物在其生長發育過程中可以向胞外分泌不同種類的酶，這些酶可以催化煙葉中某些物質的分解或合成。在煙葉中當以淀粉形式存在的糖類含量過多時，在燃吸煙支時會影響燃燒速度和燃燒完全性，燃燒時產生糊焦氣味，會使煙草香味變壞，所以淀粉含量決定著在某種程度上決定著煙葉的內在品質和吸食味的好壞。?

據研究我國烤煙淀粉含量比國外優質煙葉要高出3％左右。煙葉中殘留的淀粉是由于采收時成熟度不夠及煙葉在加工過程中淀粉的降解程度不夠造成的。煙葉中淀粉的分解、轉化、消耗、積累都將會對煙葉的外觀及內在品質產生很大的影響。?

為了降低煙葉中淀粉的含量，可以利用添加外源淀粉酶的方法，以降低煙葉中淀粉的含量，提高煙葉品質。在一定條件下向煙葉中施加一定量的淀粉酶，可使煙葉總體質量得到提高。?

發明內容

本發明旨在提供一株淀粉酶高產菌株，利用產酶菌株發酵液改善低次等煙葉感官品質，提高低次煙的工業可用性及處理初烤煙的方法。?

本發明的技術方案如下：1、芽孢桿菌(Bacillus.sp)屬的菌株，菌株保藏號是：CGMCCNo.5312，該從產酶菌株紅大陳化煙葉上分離得到，是一株淀粉酶高產菌株。?

篩選是利用產淀粉酶平板篩選培養基(g/L)初步篩選產淀粉酶菌株；?

然后用接種環將純培養物接入液體LB培養基中，37℃振蕩培養60h，發酵液離心取上清，采用DNS法檢測各發酵液中的淀粉酶活力，復篩出產淀粉酶的菌株；?

所述的培養基g/L為：淀粉20g，蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCL?10g，pH?7.0。?

將篩選菌株接種于10ml-100ml?LB液體培養基中，置于37℃恒溫搖床上培養12h，轉速為150r/min；種子液按1％的量接種于500ml?LB培養基中，同樣條件37℃，pH?7.0條件發酵60h，進行超濾濃縮，5000r/min離心去除菌體，上清用10,000MWCO進行超濾濃縮，即得精制的淀粉酶粗酶液；?

酶活測定采用采用DNS法，取酶液100μl，再加入100μl?1％的可溶性淀粉，37℃恒溫精確反應30min，滴加400μl?DNS，沸水煮沸5min顯色，測定540nm下的吸光值，以加滅活酶液的反應系統為空白；?

在此反應條件下定義：每min生成1μg葡萄糖所需酶量定義為一個酶活單位(U)，經測定65號菌株粗酶液中淀粉酶的單位酶活為826U/ml。?

將擬處理的煙葉回潮，切絲，精確稱取100g煙絲，分為兩分，一份將制備好的酶液用無菌小型噴霧器均勻噴淋煙絲，噴施量為0.35％酶液加上9.65％無菌水，發酵酶液的施酶量為2.82U/g煙葉，另一份對照組用10％無菌水處理，混勻后裝入自封袋內放置于室溫放置12h，然后放入90℃的烘箱中烘20-30min，在高溫條件下使酶失活，然后放入恒溫恒濕培養箱(22℃，55％)中平衡煙絲24h，評吸后明顯改善低次煙品質。?

本發明的具有如下優點：?

1.直接利用煙葉上分離的淀粉酶高產菌株進行發酵，由于來自煙葉的菌株產生的酶比較適應煙葉環境，作用于煙葉上的底物，能更好的改善煙葉品質。?

2.本發明的發酵培養基為LB培養基，發酵時間為60小時，操作簡單，易于控制，酶液處理煙葉為質量較差的云8587初烤煙葉，菌株65處理的煙葉感官質量的改善效果明顯，且發酵培養基對煙葉的吸食品質沒有影響。?

附圖說明

圖1本發明葡萄糖標準曲線。?

具體實施方式