[發(fā)明專利]提高藥物/基因的靶向性和轉(zhuǎn)染效率的多肽載體及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110435698.6
• 申請(qǐng)日: 2011-12-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102516395A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 冷希崗;劉蘭霞;朱敦皖;董霞;宋麗萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/87;A61K47/42;A61K48/00;A61P35/00;C08B37/08
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高藥物/基因的靶向性和轉(zhuǎn)染效率的多肽載體及用途。

背景技術(shù)

腫瘤是當(dāng)今最常見(jiàn)的發(fā)病和死亡原因之一，全世界每年有1000多萬(wàn)新發(fā)病例和620萬(wàn)患者死亡。最新統(tǒng)計(jì)資料顯示，近二十年來(lái)，中國(guó)癌癥死亡率上升了近百分之三十，每四、五個(gè)死亡者中就有一個(gè)死于癌癥，居死亡原因之首。但目前癌癥化療藥物由于缺乏靶向性，在殺死癌細(xì)胞的同時(shí)也導(dǎo)致正常細(xì)胞死亡，致使患者全身毒副作用較大。因此發(fā)展高效靶向的基因/藥物載體在腫瘤治療中起著至關(guān)重要的作用。

細(xì)胞穿透肽(Cell?penetrating?peptides)是一類可快速直接穿過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的多肽，且可以攜帶多種不同大小和性質(zhì)的生物活性物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞，包括小分子物質(zhì)、多肽、多肽核酸(peptidenucleo?acid，PNA)、蛋白質(zhì)、DNA、siRNA、納米顆粒和膠束等，這一性質(zhì)使其可能成為良好的藥物載體。其中，TAT多肽是目前研究較多的一個(gè)細(xì)胞穿透肽，來(lái)源于HIV病毒的轉(zhuǎn)錄反式激活因子蛋白(Transcriptional?activator?of?transcription，TAT)，序列為YGRKKRRQRRR，主要是由堿性氨基酸精氨酸和賴氨酸組成，帶有大量正電荷，并具有良好的親水性。已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)TATp修飾脂質(zhì)體可明顯提高其體內(nèi)外轉(zhuǎn)染效率，體外的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)30％-50％，并且明顯減少了單純脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染時(shí)的毒性。但是由于TATp直接穿膜進(jìn)入細(xì)胞而非依賴受體，缺乏組織細(xì)胞靶向性。

提高腫瘤靶向性治療的主要策略是針對(duì)腫瘤細(xì)胞相關(guān)抗原(tumor-associated?antigens，TAAs)對(duì)載體材料進(jìn)行修飾，使其對(duì)腫瘤細(xì)胞具有更高的選擇性并借此提高腫瘤細(xì)胞對(duì)基因的攝入。研究發(fā)現(xiàn)，黃體生成素釋放激素受體(luteinizing?hormone-releasing?hormone?receptor，LHRHR)在肝癌及多數(shù)性激素依賴腫瘤如乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等細(xì)胞膜上過(guò)量表達(dá)，明顯高于在相應(yīng)組織正常細(xì)胞膜上的表達(dá)，且在正常的肝、腎、脾、心、肺、腦、胸腺和骨骼肌組織的細(xì)胞膜上未有可檢測(cè)到的表達(dá)。黃體生成素釋放激素(LHRH)是由10個(gè)氨基酸組成的短肽(序列：EHWSYGLRPG)。已有體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，LHRH修飾可明顯提高所載藥物對(duì)乳腺癌、卵巢癌細(xì)胞的靶向性。

鑒于以上討論的問(wèn)題，期望提供一種針對(duì)腫瘤的強(qiáng)靶向性且高效的載體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的基因/藥物載體靶向性差及轉(zhuǎn)染效率低的難題，提供一種提高藥物/基因的靶向性和轉(zhuǎn)染效率的多肽載體。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種提高藥物/基因的靶向性和轉(zhuǎn)染效率的多肽載體的用途。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種提高藥物/基因的靶向性和轉(zhuǎn)染效率的多肽載體修飾殼聚糖形成的共聚物。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種提高藥物/基因的靶向性和轉(zhuǎn)染效率的多肽載體修飾殼聚糖形成的共聚物的用途。

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：

一種提高藥物/基因的靶向性和轉(zhuǎn)染效率的多肽載體，所述多肽載體具有式(I)的結(jié)構(gòu)：

TATp-Cys-LHRHp(I)

其中：TATp為HIV的TAT片段；

Cys為半胱氨酸；

LHRHp為促黃體生成激素釋放激素LHRH的類似物。

所述TATp的氨基酸序列為：N端-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg；或其反向序列為：N端-Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg；

所述LHRHp的氨基酸序列為：N端-Gly-Arg-Leu-Trp(D型)-Tyr-Ser-Trp-His-Glu；或其反向序列：

N端-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Trp(D型)-Leu-Arg-Gly。

所述TATp-Cys-LHRHp序列為SEQ?ID?NO.1所示：

N端-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Cys-Gly-Arg-Leu-Trp(D型)-Tyr-Ser-Trp-His-Glu；

或SEQ?ID?NO.2所示：N端

-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Cys-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Trp(D型)-Leu-Arg-Gly；