[發(fā)明專(zhuān)利]一種誘導(dǎo)產(chǎn)生Ⅲ型干擾素-λ1的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110434286.0
• 申請(qǐng)日: 2011-12-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102559818A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱應(yīng);吳建國(guó);李永奎
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/02
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/02;C12N15/24;C12N15/70;C07K14/54;C12R1/91
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 汪俊鋒

1.一種誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-λ1的方法，其特征在于，以表達(dá)純化的人源重組白介素-32蛋白作為誘導(dǎo)劑，刺激人外周血單個(gè)核細(xì)胞或其衍生的細(xì)胞系用于產(chǎn)生干擾素-λ1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，從全血或血液利用后的廢棄組分中分離得到人外周血單個(gè)核細(xì)胞，并對(duì)其在體外進(jìn)行培養(yǎng)；構(gòu)建IL-32原核表達(dá)質(zhì)粒，并誘導(dǎo)表達(dá)、純化、去內(nèi)毒素；在人外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入表達(dá)純化的人源重組白介素-32，刺激PBMC大量表達(dá)IFN-λ1并分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，?IL-32蛋白的濃度在5ng/ml之上。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，IL-32蛋白刺激PBMC的時(shí)間在24小時(shí)之上。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，從血液利用后的廢棄組分中分離得到人外周血單個(gè)核細(xì)胞的過(guò)程如下：利用PBMC與血液廢棄組分中其他成分的密度不同，采用人淋巴細(xì)胞分離液，用離心沉降的方法，從全血中將PBMC分離出來(lái)并洗滌。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，IL-32原核表達(dá)載體的構(gòu)建、誘導(dǎo)表達(dá)、純化過(guò)程如下：設(shè)計(jì)特異性的引物SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2，將IL-32的編碼序列構(gòu)建到原核表達(dá)載體pet-28a中；將原核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌，用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)IL-32.?裂解細(xì)菌后，利用商用Ni柱純化，得到較為純凈的人源重組IL-32；利用商用去內(nèi)毒素試劑，除去內(nèi)毒素；再利用規(guī)格為10?kD和50?kD超濾管進(jìn)行進(jìn)一步的純化，得到純凈的人源重組IL-32。