[發(fā)明專利]用雙指示線免疫層析半定量診斷肌紅蛋白的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110433771.6
• 申請(qǐng)日: 2011-12-22
• 公開（公告）號(hào): CN102539783A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 霍五奎;岳曉燕;馬雪明;劉寅;王晶;羅云萍;張有青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 正元盛邦(天津)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物工程技術(shù)領(lǐng)域的檢測(cè)方法，具體是一種用雙指示線免疫層析半定量診斷肌紅蛋白的方法。

背景技術(shù)

隨著我國人民生活水平的提高，高血脂、高血壓、冠心病的發(fā)病率也明顯增高。急性心肌梗塞(acute?myocardial?infarction，AMI)是冠心病中的一個(gè)非常嚴(yán)重的類型，為冠狀動(dòng)脈閉塞、血流中斷，使部分心肌因嚴(yán)重而持久的缺血發(fā)生局部壞死，從而導(dǎo)致心臟功能的嚴(yán)重?fù)p害，死亡率較高，據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有1/3-1/2的患者在送至醫(yī)院之前死亡。急性心肌梗塞在歐美多見，我國相對(duì)較少，且北京、天津華北地區(qū)較華南、華東稍多。在今后20年內(nèi)，急性心肌梗塞將是全世界范圍內(nèi)患者死亡的頭號(hào)病因。

急性心肌梗塞是中老年人的常見急癥，如果能夠早期診斷，對(duì)降低病死率有重要意義。其在急性期死亡率較高，尤其在發(fā)病早期。如果在癥狀發(fā)生后的頭1-2小時(shí)內(nèi)處理得及時(shí)和正確，就有可能使患者脫離危險(xiǎn)。對(duì)疑似急性心肌梗塞的病人，要及時(shí)做心電圖檢查，并注意追隨觀察和對(duì)比如果能作白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類、血沉、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸磷酸激酶等檢查，對(duì)早期診斷急性心肌梗塞更為有益。

肌紅蛋白(Myo)：Myo是橫紋肌中的一種氧合血紅蛋白，在心肌損傷后能迅速釋放入血。目前檢測(cè)的Myo不能區(qū)分源于骨骼肌或心肌，因此是非心臟特異性的。在急性心肌梗塞后能迅速地從壞死的心肌中釋放出來，具有高度的敏感性。其常于胸痛發(fā)作后1-2小時(shí)開始升高，急性心肌梗塞發(fā)作后4-8小時(shí)達(dá)高峰，故Myo是診斷急性心肌梗塞的早期標(biāo)志物。肌紅蛋白可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標(biāo)。但特異性差，骨骼肌損傷、創(chuàng)傷、腎功能衰竭等疾病，都可導(dǎo)致其升高。Myo陽性雖不能確診AMI，但可用于早期排除AMI診斷的重要指標(biāo)，如Myo陰性，則基本排除心肌梗死，還可用于再梗死的診斷，結(jié)合臨床，如Myo重新升高，應(yīng)考慮為再梗死或者梗死延展，由此肌紅蛋白在急性心肌梗塞的檢測(cè)中起著重要的作用。

急性心肌梗塞診斷方法主要有：診斷根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)，特征性的心電圖改變以及實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行診斷。心電圖上的ST段抬高和Q波出現(xiàn)是兩個(gè)高度提示急性心肌梗塞的變化，然而僅僅大約一半的急性心肌梗塞病例就診時(shí)有這些心電圖的改變，大約1/4的急性心肌梗塞病人缺乏典型的胸痛，只有恰巧在貼近梗死發(fā)生時(shí)記錄心電圖，或者在以后的檢查中發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期存在的病理性Q波才可能發(fā)覺。因胸痛懷疑心肌梗塞去急診在最后肯定是急性心肌梗塞的病人中，有一半是在最初的心電圖檢查中得不出急性心肌梗塞的診斷，因此對(duì)大部分病人而言，臨床醫(yī)師必須通過定時(shí)地測(cè)定心臟標(biāo)記物來肯定或否定急性心肌梗塞的診斷。而在各種心肌標(biāo)志物中，肌紅蛋白(Myo)是心肌受損后最早發(fā)生異常增加的心肌蛋白標(biāo)志物，靈敏度很高，特異性稍低，具有很高的陰性預(yù)測(cè)值，可用于排除心肌梗死。目前，臨床上常用的Myo檢測(cè)的方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和放射性免疫法，上述方法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、不利于普及而且費(fèi)用昂貴。開發(fā)簡(jiǎn)單、快速的急性心肌梗塞診斷方法具有十分重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)意義。

免疫膠體金技術(shù)是20世紀(jì)70年代初期由Faulk和Taylor始創(chuàng)，最初用于免疫電鏡技術(shù)。膠體金標(biāo)記技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物或顯色劑，于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)，現(xiàn)在已成功用于電鏡、流式細(xì)胞儀、免疫印跡、蛋白染色、體外診斷制劑的制造等領(lǐng)域。目前金標(biāo)記技術(shù)常與膜載體配合，形成特定的免疫檢測(cè)方式，如免疫滲濾試驗(yàn)和免疫層析試驗(yàn)等。免疫層析試紙條就是此技術(shù)用于體外快速診斷的一個(gè)重要發(fā)展方向，是在現(xiàn)代單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新材料技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型檢測(cè)技術(shù)。近年來該技術(shù)發(fā)展迅速，已經(jīng)在臨床診斷特別是床邊檢測(cè)(POCT)中得到了廣泛應(yīng)用，如傳染病、早孕、癌癥等的檢測(cè)。

利用膠體金的檢測(cè)方法測(cè)定血清中Myo作為急性心肌梗塞的診斷，已被開發(fā)，其檢測(cè)下限為50ng/mL。但是對(duì)于臨床上單獨(dú)使用50ng/mL這一標(biāo)準(zhǔn)不能直接、快速區(qū)分急性心肌梗塞嚴(yán)重程度，所以開發(fā)能夠檢測(cè)Myo?50～200ng/mL這一Myo診斷灰區(qū)的半定量膠體金試紙也是十分必要的。目前國內(nèi)外均無相關(guān)的試紙條出售。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的：開發(fā)簡(jiǎn)單、快速的急性心肌梗塞診斷方法具有十分重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)采用膠體金免疫層析法，建立快速檢測(cè)Myo的方法。并且能夠半定量檢測(cè)50ng/mL～200ng/mL這一Myo灰區(qū)范圍。