[發明專利]用雙指示線免疫層析半定量診斷心肌肌鈣蛋白Ⅰ的方法

無效

• 申請號: 201110433728.X
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN102565417A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 霍五奎;岳曉燕;馬雪明;劉寅;王晶;羅云萍;張有青
• 申請（專利權）人: 正元盛邦(天津)生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
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技術領域

本發明涉及一種生物工程技術領域的檢測方法，具體是一種用雙指示線免疫層析半定量診斷心肌肌鈣蛋白I的方法。?

背景技術

隨著我國人民生活水平的提高，高血脂、高血壓、冠心病的發病率也明顯增高。急性心肌梗塞(acute?myocardial?infarction，AMI)是冠心病中的一個非常嚴重的類型，為冠狀動脈閉塞、血流中斷，使部分心肌因嚴重而持久的缺血發生局部壞死，從而導致心臟功能的嚴重損害，死亡率較高，據統計，約有1/3-1/2的患者在送至醫院之前死亡。急性心肌梗塞在歐美多見，我國相對較少，且北京、天津華北地區較華南、華東稍多。在今后20年內，急性心肌梗塞將是全世界范圍內患者死亡的頭號病因。?

急性心肌梗塞是中老年人的常見急癥，如果能夠早期診斷，對降低病死率有重要意義。其在急性期死亡率較高，尤其在發病早期。如果在癥狀發生后的頭1-2小時內處理得及時和正確，就有可能使患者脫離危險。對疑似急性心肌梗塞的病人，要及時做心電圖檢查，并注意追隨觀察和對比如果能作白細胞計數和分類、血沉、谷草轉氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸磷酸激酶等檢查，對早期診斷急性心肌梗塞更為有益。肌鈣蛋白系心肌和橫紋肌的收縮調節蛋白，由三個亞基即TnC、TnI、TnT組成，心肌中主cTnI和cTnT兩種亞型，其靈敏度高、特異性強，發病后持續時間長，是目前心肌損傷較好的確定指標。相比之下cTnI較cTnT心肌特異性更強。心肌損傷后4-8小時即可在外周血中測得cTnI異常，其增高可持續5-8天(cTnI)。長期以來，傳統的心肌酶譜特別是肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)是臨床診斷AMI的重要指標，但CK、CK-MB等并非心臟特有的酶，其增高也非特異性的。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是心肌僅有的特異抗原，作為心肌細胞損傷的標志，在血循環中的高度特異性和和敏感性，越來越受到人們的關注。心肌肌鈣蛋白I是目前公認的、特異性最高且持續時間最長的診斷心梗的可靠指標，用于心肌損傷特別是微小損傷的診斷，也是心臟手術時心肌缺血的可靠指標，也可用于評價心肌的保護性措施。這表明，未來我國對于高質量的心肌梗塞診斷產品，尤其是心肌肌鈣蛋白I診斷產品的需求將越來越大。?

急性心肌梗塞診斷方法主要有：診斷根據典型的臨床表現，特征性的心電圖改變以及實驗室檢查進行診斷。心電圖上的ST段抬高和Q波出現是兩個高度提示急性心肌梗塞的變化，然而僅僅大約一半的急性心肌梗塞病例就診時有這些心電圖的改變，大約1/4的急性心肌梗塞病人缺乏典型的胸痛，只有恰巧在貼近梗死發生時記錄心電圖，或者在以后的檢查中發現?長期存在的病理性Q波才可能發覺。因胸痛懷疑心肌梗塞去急診在最后肯定是急性心肌梗塞的病人中，有一半是在最初的心電圖檢查中得不出急性心肌梗塞的診斷，因此對大部分病人而言，臨床醫師必須通過定時地測定心臟標記物來肯定或否定急性心肌梗塞的診斷。而在各種心肌標志物中，心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是心肌僅有的特異抗原，作為心肌細胞損傷的標志，在血循環中的高度特異性和和敏感性，是目前公認的、特異性最高且持續時間最長的診斷心梗的可靠指標。目前，臨床上常用的cTnI檢測的方法為酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和放射性免疫法，上述方法費時、費力、不利于普及而且費用昂貴。開發簡單、快速的急性心肌梗塞診斷方法具有十分重要的經濟價值和社會意義。?

免疫膠體金技術是20世紀70年代初期由Faulk和Taylor始創，最初用于免疫電鏡技術。膠體金標記技術是以膠體金作為示蹤標志物或顯色劑，于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術，現在已成功用于電鏡、流式細胞儀、免疫印跡、蛋白染色、體外診斷制劑的制造等領域。目前金標記技術常與膜載體配合，形成特定的免疫檢測方式，如免疫滲濾試驗和免疫層析試驗等。免疫層析試紙條就是此技術用于體外快速診斷的一個重要發展方向，是在現代單克隆抗體技術、膠體金免疫層析技術和新材料技術基礎上發展起來的新型檢測技術。近年來該技術發展迅速，已經在臨床診斷特別是床邊檢測(POCT)中得到了廣泛應用，如傳染病、早孕、癌癥等的檢測。?

利用膠體金的檢測方法測定血清中cTnI作為急性心肌梗塞的診斷，已被開發，其檢測下限為1ng/mL。但是對于臨床上單獨使用1ng/mL這一標準不能直接、快速區分心肌梗塞嚴重程度，所以開發能夠檢測cTnI?1～5ng/mL這一cTnI診斷灰區的半定量膠體金試紙也是十分必要的。目前國內外均無相關的試紙條出售。?

發明內容