[發明專利]用雙指示線免疫層析半定量診斷肌酸激酶同工酶的方法

無效

• 申請號: 201110433727.5
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN102539769A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 霍五奎;岳曉燕;馬雪明;劉寅;王晶;羅云萍;張有青
• 申請（專利權）人: 正元盛邦(天津)生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/573;G01N33/558
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技術領域

本發明涉及一種生物工程技術領域的檢測方法，具體是一種用雙指示線免疫層析半定量診斷肌酸激酶同工酶的方法。

背景技術

隨著我國人民生活水平的提高，高血脂、高血壓、冠心病的發病率也明顯增高。急性心肌梗塞(acute?myocardial?infarction，AMI)是冠心病中的一個非常嚴重的類型，為冠狀動脈閉塞、血流中斷，使部分心肌因嚴重而持久的缺血發生局部壞死，從而導致心臟功能的嚴重損害，死亡率較高，據統計，約有1/3-1/2的患者在送至醫院之前死亡。急性心肌梗塞在歐美多見，我國相對較少，且北京、天津華北地區較華南、華東稍多。在今后20年內，急性心肌梗塞將是全世界范圍內患者死亡的頭號病因。

急性心肌梗塞是中老年人的常見急癥，如果能夠早期診斷，對降低病死率有重要意義。其在急性期死亡率較高，尤其在發病早期。如果在癥狀發生后的頭1-2小時內處理得及時和正確，就有可能使患者脫離危險。對疑似急性心肌梗塞的病人，要及時做心電圖檢查，并注意追隨觀察和對比如果能作白細胞計數和分類、血沉、谷草轉氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸磷酸激酶等檢查，對早期診斷急性心肌梗塞更為有益。

肌酸激酶同工酶(CK-MB)，屬于特異性較強的一種心肌標志物，肌酸激酶具有3種同工酶，它們分別是CK-MM(肌肉型)，CK-BB(腦型)及CK-MB(心肌型)。在正常人的血清中的肌酸激酶幾乎都是CK-MM，而CK-MB出現在心肌組織，約占15～20％。人體各組織(除腓腸肌外)，只有心肌含有較高的CK-MB，故此同工酶對診斷心肌梗塞的特異性可高達100％，因此CK-MB是至今為止診斷心肌梗塞最佳的血清酶指標。急性心肌梗塞后6小時升高致正常上限2倍，24小時達峰值，36小時降致基線，心梗發生時，血清CK-MB可增高10～25倍，超過CK總活力增高的倍數10～12倍。在患有某些其他疾病的情況下，如肌肉疾病、中毒性休克、創傷，腦血管意外、甲狀腺功能低下等，也有會在血清當中檢出CK-MB，不過在這些非心肌梗塞疾病中，血清CK-MB占總CK的百分比平均為2.5～7.5％(正常人＜2％)，均低于心梗的7.5～19.5％。在急性心肌梗塞發生時，肌酸激酶會從受損的心肌細胞里釋放，導致CK-MB在急性心肌梗塞的病人血清中明顯升高。通常在心肌梗塞12～24小時達高峰，并且在48～72小時恢復正常。借助CK-MB的檢測，可檢出病人CK-MB的活性，對于提供臨床醫師早期診斷心肌梗塞是非常有價值。

急性心肌梗塞診斷方法主要有：診斷根據典型的臨床表現，特征性的心電圖改變以及實驗室檢查進行診斷。心電圖上的ST段抬高和Q波出現是兩個高度提示急性心肌梗塞的變化，然而僅僅大約一半的急性心肌梗塞病例就診時有這些心電圖的改變，大約1/4的急性心肌梗塞病人缺乏典型的胸痛，只有恰巧在貼近梗死發生時記錄心電圖，或者在以后的檢查中發現長期存在的病理性Q波才可能發覺。因胸痛懷疑心肌梗塞去急診在最后肯定是急性心肌梗塞的病人中，有一半是在最初的心電圖檢查中得不出急性心肌梗塞的診斷，因此對大部分病人而言，臨床醫師必須通過定時地測定心臟標記物來肯定或否定急性心肌梗塞的診斷。而在各種心肌標志物中，CK-MB是臨床醫生最信賴的AMI檢測“金標準”，特異性較高。目前，臨床上常用的CK-MB檢測的方法為酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和放射性免疫法，上述方法費時、費力、不利于普及而且費用昂貴。開發簡單、快速的急性心肌梗塞診斷方法具有十分重要的經濟價值和社會意義。

免疫膠體金技術是20世紀70年代初期由Faulk和Taylor始創，最初用于免疫電鏡技術。膠體金標記技術是以膠體金作為示蹤標志物或顯色劑，于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術，現在已成功用于電鏡、流式細胞儀、免疫印跡、蛋白染色、體外診斷制劑的制造等領域。目前金標記技術常與膜載體配合，形成特定的免疫檢測方式，如免疫滲濾試驗和免疫層析試驗等。免疫層析試紙條就是此技術用于體外快速診斷的一個重要發展方向，是在現代單克隆抗體技術、膠體金免疫層析技術和新材料技術基礎上發展起來的新型檢測技術。近年來該技術發展迅速，已經在臨床診斷特別是床邊檢測(POCT)中得到了廣泛應用，如傳染病、早孕、癌癥等的檢測。

利用膠體金的檢測方法測定血清中CK-MB作為急性心肌梗塞的診斷，已被開發，其檢測下限為5ng/mL。但是對于臨床上單獨使用5ng/mL這一標準不能直接、快速區分急性心肌梗塞嚴重程度，所以開發能夠檢測CK-MB?5～10ng/mL這一CK-MB診斷灰區的半定量膠體金試紙也是十分必要的。目前國內外均無相關的試紙條出售。

發明內容