[發(fā)明專利]一種突變多角體蛋白及其制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110432043.3 | 申請日： | 2011-12-21 |
| 公開（公告）號： | CN102516369A | 公開（公告）日： | 2012-06-27 |
| 發(fā)明（設計）人： | 杜君卿;陳劍清;舒特俊;張耀洲 | 申請（專利權）人： | 天津耀宇生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/01 | 分類號： | C07K14/01;C12N15/34;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京匯澤知識產(chǎn)權代理有限公司 11228 | 代理人： | 張艷贊 |
| 地址： | 300457 天津市濱海新區(qū)經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 突變 多角體 蛋白 及其 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種突變多角體蛋白,?其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。
2.一種權利要求1所述突變多角體蛋白的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(a)由PCR擴增的方法獲得野生型多角體蛋白基因；
(b)通過設計引物，將pET-28a載體上的所有蛋白標簽去除，并連接步驟(a)所得到的多角體蛋白基因，構建成重組表達載體pET-28a-polh；
(c)利用商品化的定點突變試劑盒，將野生型多角體蛋白氨基酸序列中N端4個連續(xù)的堿性氨基酸突變?yōu)樗嵝园被幔O計含突變位點的引物；
(d)得到重組表達載體pET-28a-polh后，利用商品化的試劑盒，通過步驟(c)所得突變引物進行PCR擴增，獲得完整的含突變位點的重組表達載體；
(e)將步驟(d)所得重組表達載體轉入大腸桿菌BL21進行誘導表達，獲得所述突變多角體蛋白。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(c)中將野生型多角體蛋白氨基酸序列中的第32-35位4個連續(xù)的堿性氨基酸KRKK突變成了酸性氨基酸ESEE。
4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(e)中得到的突變多角體蛋白在pH8.5時能溶，而野生型多角體蛋白在pH10.8時能溶。
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