[發明專利]副豬嗜血桿菌三價滅活疫苗的生產方法

有效

• 申請號: 201110431884.2
• 申請日: 2011-12-21
• 公開（公告）號: CN102499982A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 郭莉莉;程增青;馬爽;周旭斌;申洪銀;馮陽;李金積;王福軍;劉曉東;王宗升
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/116
• 分類號: A61K39/116;A61K39/102;A61P31/04
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種副豬嗜血桿菌三價滅活疫苗的生產方法，屬于獸用生物制品領域。

背景技術

豬副嗜血桿菌病，又稱革拉澤氏病(Glasser′s?disease)，是由副豬嗜血桿菌引起的一種以呼吸道癥狀、跛行、胸膜炎、心包炎、腹膜炎、關節炎和腦膜炎等為特征的豬呼吸道傳染病。隨著養豬業的發展，豬副嗜血桿菌病已成為近年來嚴重危害養豬業的新發細菌性傳染病，呈世界性分布，并已證實在我國絕大多數豬場存在和流行，可影響2周齡到4月齡的豬，但主要在斷奶前后和仔豬階段發病，常見于5-8周齡的豬，發病率一般為10-15％，嚴重時死亡率可達50％以上，給我養豬業造成巨大的損失。(蔡旭旺，陳煥春，劉正飛，吳斌，金梅林，Blackall?P?J.副豬嗜血桿菌的分離培養和血清型鑒定.華中農業大學學報，2005，24：55-58；Oliveira?S&Pijoan(2004)Haemophilus?parasuis：new?trends?on?diagnosis，epidemiology?and?control.Vet?Microbiol?99：1-12.)

傳統的血清分型方法是根據熱穩定性可溶性抗原和瓊脂擴散試驗(AGPT)，已有15種血清型得到證實，而且還有一定數量不能分型的副豬嗜血桿菌(Kielstein?P&Rapp-Gabrielson?VJ.Designation?of?15serovars?of?Haemophilus?parasuis?on?the?basis?of?immunodiffusion?using?heat-stable?antigen?extracts.J?Clin?Microbiol.1992，30：862～865)。目前已經發現并證實的副豬嗜血桿菌的毒力因子及其潛在的毒力因子有：莢膜、菌毛、外膜蛋白、脂多糖、轉鐵蛋白、神經氨酸酶等(李靜怡，張建民，徐成剛，郭莉莉，陳濟鐺，廖明.副豬嗜血桿菌主要毒力因子及致病機理研究進展沖國畜牧獸醫，2010年第37卷第12期)。副豬嗜血桿菌血清型眾多以及很大比例的不能分型的菌株，具有明顯的地方性特征，菌株毒力及致病性之間具有明顯的差異性，血清型間交叉保護性極差或缺少，因此研制與當地相關型的、具有高效交叉保護力的疫苗是預防和控制副豬嗜血桿菌病的必然要求(Baumann?G，Bilkei?G.Effect?of?vaccinating?sows?and?their?piglets?on?the?development?ofdisease?induced?by?a?virulent?strain?of?Haemophilus?parasuis?serovar?5.Vet.Rec.2002，151：18-21)。

發明內容

本發明的目的是采用免疫原性良好的副豬嗜血桿菌4型YBH04株、5型YBH05株和13型YBH13株分別接種于適宜培養基培養，收獲培養物，經甲醛溶液滅活，加入礦物油佐劑混合乳化制成。用于預防由4、5和13型副豬嗜血桿菌引起的豬副嗜血桿菌病。

一、生產用毒株

1.菌株來源

用于制造疫苗的副豬嗜血桿菌(Haemophilus?parasuis)菌株為YBH04、YBH05和YBH13株，由青島易邦生物工程有限公司分離、鑒定。國內分離株4型YBH04株(2009年從山東省某豬場病死豬的關節液中分離)和5型YBH05株(2008年從山東省平度某豬場病死豬的關節液中分離)，13型YBH13株(2009年從山東省濟南某豬場病死豬的心臟中分離)。以上3個菌株已于2011年11月23日送交北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號：YBH04株為CGMCC?No.5479、YBH05為CGMCC?No.5480和YBH13株為CGMCC?No.5501。

2.菌株特點

(1)形態及生化特性??副豬嗜血桿菌菌株YBH04、YBH05和YBH13株菌均為革蘭氏陰性，細小桿菌，具有多種不同的形態，從單個的球桿菌到長的、細長的、以致絲狀的菌體。

無溶血現象、脲酶試驗陰性，氧化酶試驗陰性，接觸酶試驗陽性，硝酸鹽還原試驗陽性，吲哚試驗陰性并發酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、核糖和麥芽糖等碳水化合物。