[發(fā)明專利]一種農(nóng)藥降解酶制劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110431638.7
• 申請日: 2011-12-20
• 公開（公告）號: CN102994488A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝建飛;石元亮;盧宗云;張惠文;李鵬程;邢云鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 遼寧中科生物工程有限公司
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;A62D3/02;A62D101/04;A62D101/26
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及穩(wěn)定酶制劑活性的技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種農(nóng)藥降解酶制劑。

背景技術(shù)

農(nóng)藥污染所導(dǎo)致的環(huán)境安全及食品安全問題是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和人類健康面臨的重大問題。在我國，由于農(nóng)藥使用的不規(guī)范，農(nóng)產(chǎn)品及環(huán)境都遭受到了嚴(yán)重的農(nóng)藥污染。農(nóng)藥污染所導(dǎo)致的環(huán)境安全及食品安全等問題越來越受到關(guān)注，正成為政府和廣大消費(fèi)者關(guān)注的焦點(diǎn)之一。

相關(guān)報導(dǎo)顯示我國農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留嚴(yán)重，居民日常膳食中的各類農(nóng)藥攝入量，高于美國、日本和歐盟等發(fā)達(dá)國家數(shù)十倍。殘留農(nóng)藥可以改變?nèi)梭w荷爾蒙，使女性內(nèi)分泌紊亂，男性少精，精子成活率低；殘留農(nóng)藥進(jìn)入人體，一部分通過腎肝轉(zhuǎn)化或排出，增加機(jī)體工作量引起病變；一部分和血液的血紅蛋白結(jié)合，降低其供氧能力。世界衛(wèi)生組織公布的調(diào)查報告表明，殘留農(nóng)藥在人體內(nèi)長期蓄積滯留會引發(fā)慢性中毒，以致誘發(fā)許多慢性病癥。如心腦血管病、糖尿病、癌癥等，農(nóng)藥殘留甚至通過胚胎和乳汁轉(zhuǎn)移給下一代，并能夠?qū)е隆叭隆保褐掳⒅禄⒅峦蛔儯袝r直接導(dǎo)致食用者死亡。環(huán)境激素是全世界公認(rèn)的造成生物異常生長發(fā)育的主要兇手。在國際組織確定的70種環(huán)境激素中，農(nóng)藥就有40種。由于農(nóng)藥的使用，蔬菜瓜果等農(nóng)產(chǎn)品經(jīng)過清洗后的水流入土壤之中，農(nóng)藥污染物仍未被最終降解，又可能通過其它途徑進(jìn)入人體。

農(nóng)藥降解酶通過酶促反應(yīng)原理水解磷酸酯鍵，降解農(nóng)藥殘留，是目前解決農(nóng)藥殘留問題的最有效技術(shù)手段，具有安全、高效、無二次污染等特點(diǎn)。農(nóng)藥降解酶制劑的穩(wěn)定性問題是其研制過程中的關(guān)鍵問題。酶是一種生物活性物質(zhì)，受溫度、pH值影響較大，如果配方體系不佳，酶很容易失去活性。所以，研制穩(wěn)定的農(nóng)藥降解酶制劑配方，是農(nóng)藥降解酶發(fā)揮作用的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種農(nóng)藥降解酶制劑。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種農(nóng)藥降解酶制劑，農(nóng)藥降解酶制劑由農(nóng)藥降解酶劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、保護(hù)劑和水組成，其按體積百分比計，10％-20％的農(nóng)藥降解酶劑、0.1％-0.2％的穩(wěn)定劑、1％-5％的表面活性劑、30％-80％的保護(hù)劑余量為水。

所述農(nóng)藥降解酶劑為在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)后的保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號：CGMCC?No.1529的基因工程菌株發(fā)酵培養(yǎng)破碎。

所述農(nóng)藥降解酶劑為將基因工程菌在含氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基中37℃，溶氧量20-30％，培養(yǎng)10-15小時，而后按體積比1％-5％的接種量將培養(yǎng)液接種于含氨芐青霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，在37℃，溶氧量20-30％，培養(yǎng)2-4小時后向發(fā)酵培養(yǎng)培養(yǎng)基中加入終濃度為25mmol/L的乳糖后，將培養(yǎng)溫度降到22℃-25℃，誘導(dǎo)表達(dá)15-22個小時，將上述所得發(fā)酵液以5000rpm離心10分鐘收集菌體，并加入1/10-1/20發(fā)酵液體積的0.1mol/LpH?7.0的磷酸鹽緩沖液回溶菌體，5000rpm離心10分鐘重新收集菌體，將收集的菌體平鋪于鐵制或鋼制容器中，菌體厚度0.1-0.2cm，向容器中加入液氮破碎菌體，加入液氮的高度高于菌體表面0.5-1cm，待液氮揮發(fā)干凈后將菌體真空冷凍干燥，將凍干后的菌體用0.1mol/L?pH?7.0的磷酸鹽緩沖液回溶至原發(fā)酵液體積，10000-12000Rpm離心10-20分鐘收集上清液，即為農(nóng)藥降解酶劑。

所述穩(wěn)定劑為聚六亞甲基胍；表面活性劑為椰油酰胺丙基甜菜堿；保護(hù)劑為甘油。所述發(fā)酵培養(yǎng)為按重量百分比計，蛋白胨2％-3％、酵母粉2％-3％、甘油2％-3％、K₂HPO₄?0.25％、KH₂PO₄?0.016％、NaCl?0.05％、MgSO₄·H₂O?0.025％，余量為蒸餾水，121℃滅菌20分鐘；含氨芐青霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基為每毫升發(fā)酵培養(yǎng)基中添加50-75μg的氨芐青霉素。所述LB液體培養(yǎng)基為按重量百分比計，胰蛋白胨1％、酵母粉0.5％、氯化鈉1％，余量為蒸餾水，121℃滅菌20分鐘；含氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基為每毫升LB液體培養(yǎng)基中添加50-75μg的氨芐青霉素。所述回溶菌體離心收集菌體，將收集的菌體平鋪于鐵制或鋼制容器中，菌體厚度0.1-0.2cm，向容器中加入液氮破碎菌體，加入液氮的高度高于菌體表面0.5-1cm，待液氮揮發(fā)干凈后將菌體真空冷凍干燥，其真空度30pa，凍干溫度-50℃，凍干時間8-12h。所述農(nóng)藥降解酶制劑用于降解有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留。

本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)：