[發明專利]富硒保健品中硒形態的測定方法

無效

• 申請號: 201110428291.0
• 申請日: 2011-12-20
• 公開（公告）號: CN102520090A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 朱元元
• 申請（專利權）人: 蘇州硒谷科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 范晴

1.?一種富硒保健品中硒形態的測定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：

（1）富硒保健品的預處理：使用提取緩沖液Tris-HCl對富硒保健品樣品進行提取，提取處理后依次加入有效量的蛋白酶K、蛋白酶XIV進行水解提取得到待測樣品溶液；

（2）采用氫化物發生——原子熒光光譜法與高效液相色譜法聯用分別對標準硒形態溶液和待測樣品溶液進行測定；用峰高或峰面積進行定量，用數據處理中的外標法，繪制標準工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標法校正，按照公式（1）可計算得到待測樣品溶液中硒代胱氨酸（Se-Cys2）、硒甲基半胱氨酸（SeMeCys）、Se(IV)、硒代蛋氨酸（SeMet）的含量；

X=C×V/m????(1)

其中：?X為樣品中待測物質的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；C為待測液中該物質的濃度，單位為微克每升（μg/L）；V為測定液體總體積，單位為毫升（mL）；??F為稀釋倍數；m為稱樣質量（體積），單位為克（g/mL）。

2.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中提取緩沖液Tris-HCl的濃度為100?mmol/L，pH7.5，液體保健品樣品與提取液的比例（V:V）為1:5~1:10或者固體保健品樣品與提取液的比例（m:V）為1:25~1:100。

3.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中提取方法采用超聲提取，提取時間為10~30?min。

4.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中蛋白酶K與液體保健品樣品的比例（m:V）為1：100~1：2000或者蛋白酶K與固體保健品樣品的比例（m:m）為1：20~1：100；水解溫度控制在40～55℃。

5.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中蛋白酶XIV與液體保健品樣品的比例（m:V）為1：100~1：2000，蛋白酶XIV與固定保健品樣品的比例（m:m）為1：20~1：100；水解溫度控制在30～45℃。

6.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中水解處理后樣品溶液在0～10℃下，離心處理后上清液過0.2～0.5?μm的濾膜，制得待測上清液。

7.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中高效液相色譜法和氫化物發生——原子熒光光譜法聯用時液相色譜及原子熒光條件為：

????流動相（40?mmol/L(NH₄)₂HPO₄，pH?6.0）；流速1?mL/min；進樣體積100?μL；蠕動泵轉速65?rpm；燈電流/輔陰極：100mA，45mA；光電倍增管負高壓：300V；載氣流速：300mL/min；屏蔽氣流速：700mL/min。

8.?根據權利要求7所述的方法，其特征在于所述方法中高效液相色譜法和氫化物發生——原子熒光光譜法聯用時氫化物發生條件是：

????還原劑成分：0.35%NaOH+1.2%NaBH₄，流速：6?mL/min；氧化劑成分：0.35%NaOH+0.8%H₂O₂，流速：6?mL/min；載流：10%?HCl，流速：6?mL/min。

9.?根據權利要求8所述的方法，其特征在于所述方法開機后對液相色譜及原子熒光進行設置，待儀器穩定后，先做標準曲線，然后測定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸（Se-Cys2）、硒甲基半胱氨酸（SeMeCys）、Se(IV)、硒代蛋氨酸（SeMet）的保留時間依次為：2.6?min，3.2?min，4.0?min，5.0?min，待測樣品中的硒代胱氨酸（Se-Cys2）、硒甲基半胱氨酸（SeMeCys）、Se(IV)、硒代蛋氨酸（SeMet）的色譜峰保留時間與標準溶液相比變化范圍在±5%之內即認為為該待測定物質。