[發(fā)明專利]一種體內(nèi)細(xì)菌生物被膜感染動(dòng)物模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110427983.3
• 申請(qǐng)日: 2011-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN102669017A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪洋;易力;史明艷;張才;劉一塵;張蕾;李小康;余祖華;張春杰;程相朝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號(hào): A01K61/00
• 分類號(hào): A01K61/00
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

1.一種體內(nèi)細(xì)菌生物被膜感染動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：包括以下步驟，

(1)細(xì)菌懸液的準(zhǔn)備；

(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉及背部肌肉感染；

(3)鑒定動(dòng)物模型相關(guān)指標(biāo)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體內(nèi)細(xì)菌生物被膜感染動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：步驟(1)中細(xì)菌懸液由以下方法獲得：將-80℃溫度下保存的用于接解的細(xì)菌劃哥倫比亞血平板，挑單菌落在培養(yǎng)基中37℃的溫度下過夜培養(yǎng)；然后取菌液加入THB培養(yǎng)基，37℃搖床繼續(xù)培養(yǎng)過夜，涂片檢查為純培養(yǎng)后，以1∶100接種搖菌培養(yǎng)4-6小時(shí)獲得對(duì)數(shù)生長期的菌體，測(cè)定OD600值為08-1.0之間；將菌體清洗2-3遍后；調(diào)節(jié)細(xì)菌濃度為10⁶個(gè)/ml備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的體內(nèi)細(xì)菌生物被膜感染動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述用于接種的細(xì)菌為豬鏈球菌臨床分離株。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一條所述的體內(nèi)細(xì)菌生物被膜感染動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為純系斑馬魚。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一條所述的體內(nèi)細(xì)菌生物被膜感染動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉及背部肌肉感染為用濃度95μg/mL的三卡因間氨苯酸乙脂甲磺酸鹽(MS-222)將斑馬魚麻醉；背部接種5×10⁴/魚的細(xì)菌數(shù)量，對(duì)照組注射THB培養(yǎng)基，感染后24h，無菌采取背部感染的部位，將背部肌肉固定于2％的多聚甲醛中。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體內(nèi)細(xì)菌生物被膜感染動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：分別在感染24小時(shí)后將所述實(shí)驗(yàn)方法的斑馬魚處死，對(duì)斑馬魚相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行鑒定。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體內(nèi)細(xì)菌生物被膜感染動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述的鑒定包括對(duì)背部肌肉甲醛固定制備組織切片，進(jìn)行HE染色、革蘭氏染色和掃描電鏡(SEM)觀察。?