[發明專利]一種快速測定曲或酒醅或發酵醪中氨基甲酸乙酯的方法

有效

• 申請號: 201110427384.1
• 申請日: 2011-12-20
• 公開（公告）號: CN102608226A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 范文來;徐巖
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種快速測定固態發酵物曲、酒醅或發酵醪中氨基甲酸乙酯EC的方法，其特征在于對固態發酵物進行超聲萃取，離心取上清液置于頂空瓶中，加入內標溶液氨基甲酸丙酯PC，再加入氯化鈉飽和，旋緊瓶蓋，插入萃取頭攪拌吸附，萃取富集EC，再用氣相色譜-質譜聯用技術進行定量分析；步驟為：

（1）超聲萃?。喝?0?g固態發酵物，加入20?mL實驗專用水，浸泡30?min，超聲萃取30?min，離心取上清；所述實驗專用水為超純水煮沸5-10min冷卻；

（2）頂空固相微萃取：吸取上述超聲萃取后上清液8?mL置于20?mL的頂空瓶中，加入5?μL乙醇配制的內標溶液PC，加入3?g氯化鈉，旋緊瓶蓋，插入萃取頭，在50-70℃下250?rpm恒溫攪拌萃取30-60?min；

（3）氣相色譜-質譜聯用檢測：萃取完畢后將萃取頭取出，插入氣相色譜進樣口250℃熱解吸5?min，毛細管柱為DB-WAX或HP-5，載氣為He，流速2?mL/min；不分流進樣；程序升溫：50℃恒溫2?min，以5℃/min的速度升溫至170℃，再以10℃/min的速度升溫至230℃，保持5?min；MS條件為EI電離源，電子能量70?eV，離子源溫度230?°C，掃描范圍35.00~350.00?amu，SIM模式特征離子62；通過將樣品和標準品的保留時間對比來確認目標物EC以及內標物PC峰；

DB-WAX毛細管柱為：60或30?m×0.25?mm?i.d.×0.25?μm；

HP-5毛細管柱為：60或30m×0.25?mm?i.d.×0.25?μm；

（4）標準曲線的建立：制作標準曲線所用的一系列EC濃度的溶液，先用EC標準品和色譜純無水乙醇配制而成的高濃度EC溶液作為儲藏液，其他濃度梯度EC溶液均用儲藏液逐步稀釋所得；將上述稀釋后的EC溶液加入到實驗專用水中，加入內標溶液PC，頂空固相微萃取富集，最后進行GC-MS定量檢測，以EC與PC峰面積之比為橫坐標，EC與PC的濃度比為縱坐標，繪制標準曲線；

（5）酒曲、酒醅或發酵醪樣品測定：對樣品采用浸泡、超聲萃取預處理，離心后取上清液，然后用頂空固相微萃取技術富集上清液中的EC，再用氣相色譜-質譜聯用進行定性定量分析，根據樣品中EC/PC的面積比，對照標準曲線計算樣品中EC的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述萃取頭為PDMS、PA、PDMS/DVB、或DVB/CAR/PDMS。