[發(fā)明專(zhuān)利]一種快速分離辣椒疫霉菌的方法及其專(zhuān)用培養(yǎng)基

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110426860.8
• 申請(qǐng)日: 2011-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102391957A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊明英;曹繼芬;趙志堅(jiān);李向東;孫道旺
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境資源研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/14
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 昆明合眾智信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 53113
• 代理人: 康珉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬植物病理學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速分離辣椒（Capsicum?annuum?Linn）疫霉菌（Phytophthora?capsici?Leonian）的方法及其專(zhuān)用培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

辣椒疫病是辣椒最重要的真菌性病害，在辣椒的整個(gè)生育周期內(nèi)都可發(fā)病，除危害辣椒的根、莖、枝、葉和果實(shí)外，還危害番茄、茄子、黃瓜、甜瓜等作物，常引起大面積死株，一般田塊死株率為20％～30％，嚴(yán)重的達(dá)90％以上，可造成毀滅性損失，并在各種植區(qū)均有發(fā)生，高溫、高濕地區(qū)尤其猖獗，局部地區(qū)危害嚴(yán)重，減產(chǎn)率嚴(yán)重的高達(dá)60%，嚴(yán)重影響到農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收益和辣椒產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

辣椒疫病是由疫霉屬(Phytophthora)卵菌，辣椒疫霉菌（Phytophthora?capsici?Leonian）引起的辣椒病害。表現(xiàn)為葉水漬斑、幼苗猝倒、根莖腐、冠腐、枝干、果實(shí)潰瘍和腐爛等，植株受害部位產(chǎn)生邊緣不明顯的黑褐色水漬狀病斑,可迅速引起病部的壞死和腐爛,潮濕時(shí)，病部尤其是葉背面產(chǎn)生疏松的白色霉層，即病菌的孢囊梗和孢子囊。

????在對(duì)辣椒疫病的研究中，首先需對(duì)病原菌進(jìn)行分離和培養(yǎng)，現(xiàn)有技術(shù)采用病莖處理分離培養(yǎng)方法存在所用時(shí)間長(zhǎng)，分離到的菌株率低（61.82%），且易受雜菌污染，費(fèi)工費(fèi)時(shí)等問(wèn)題。研究出新的簡(jiǎn)便快速的分離方法是提高辣椒疫病基礎(chǔ)研究的重要環(huán)節(jié)，也是本領(lǐng)域急待解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明人歷經(jīng)3年，做了大量的試驗(yàn)研究，發(fā)明了一種快速分離辣椒病霉菌的方法及專(zhuān)用培養(yǎng)基，用于辣椒疫病的基礎(chǔ)研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有辣椒疫霉菌的分離培養(yǎng)過(guò)程中分離率低、費(fèi)工費(fèi)時(shí)的技術(shù)問(wèn)題，其目的是提供一種經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)易、快捷，且分離率高的一種快速分離辣椒疫霉菌的方法及其對(duì)辣椒疫霉菌分離培養(yǎng)效率高的專(zhuān)用培養(yǎng)基。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

1、一種快速分離辣椒疫霉菌的方法，按以下步驟進(jìn)行：

（1）病樣編號(hào)：分離前將采集辣椒植株上感染了辣椒疫病的病莖或病葉按不同采樣的地點(diǎn)、品種進(jìn)行編號(hào)；

（2）病樣切取：將編號(hào)后的病莖，以病樣的病部與健康部的交界處為中心，切取病健部分共長(zhǎng)度為9～11cm的病樣，并使病樣中病部組織的長(zhǎng)度和健康部組織的長(zhǎng)度各占病樣長(zhǎng)度的1/2，用自來(lái)水清洗后晾干表面水分；

（3）病樣消毒：將上述切取的病樣用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%酒精噴霧，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%次氯酸鈉液浸泡30秒，用無(wú)菌水清洗后晾干水分；

（4）專(zhuān)用培養(yǎng)基的配制

????將蒸餾水1000ml、黑麥60g、蔗糖20g和瓊脂18g混合制成基本培養(yǎng)基，將所述的基本培養(yǎng)基高壓滅菌后冷至40～50℃時(shí)，加入10mg的利福平和100mg劑型為70%五氯硝基苯粉劑，搖勻，即制成所述的專(zhuān)用培養(yǎng)基，然后倒入滅菌培養(yǎng)皿中備用；

（5）無(wú)菌操作室分離

??將步驟（3）的病樣在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行剪取分離培養(yǎng)，先剪去該病莖的四周，再以病樣的病部與健康部的交界處為中心，剪成長(zhǎng)度為0.4～0.5cm的病莖塊，并使每塊病莖中病部組織的長(zhǎng)度和健康部組織的長(zhǎng)度各占病莖塊長(zhǎng)度的1/2，再用鑷子將所剪的0.4～0.5cm病樣接入步驟（4）配制的專(zhuān)用培養(yǎng)基中，每皿接入5塊病樣，放在20℃恒溫箱中培養(yǎng)，3-5天后長(zhǎng)出辣椒疫霉菌菌絲再進(jìn)行轉(zhuǎn)接純化。

2、一種分離培養(yǎng)辣椒疫霉菌的專(zhuān)用培養(yǎng)基，通過(guò)下述方法制備得到：??

將蒸餾水1000ml、黑麥60g、蔗糖20g和瓊脂18g混合制成基本培養(yǎng)基，將所述的基本培養(yǎng)基高壓滅菌后冷至40～50℃時(shí)，加入10mg的利福平和100mg劑型為70%五氯硝基苯粉劑，搖勻即制成所述的專(zhuān)用培養(yǎng)基。

本發(fā)明的原理及其有益效果：