[發明專利]一種基于RNA聚合酶結合位點的原核生物分子標記方法

無效

• 申請號: 201110426573.7
• 申請日: 2011-12-19
• 公開（公告）號: CN102424838A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 崔海瑞;李春楠;葉慶富;汪海燕;王偉博
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種基于RNA聚合酶結合位點的原核生物分子標記方法，其特征在于，包括：根據原核生物RNA聚合酶結合位點設計并合成引物，提取原核生物基因組DNA作為模板，利用所設計的引物和所提取的DNA進行降落PCR擴增，擴增產物經凝膠電泳分離后檢測原核生物RNA聚合酶結合位點間區的差異。

2.如權利要求1所述的基于RNA聚合酶結合位點的原核生物分子標記方法，其特征在于，所述的引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物是基于原核生物基因組啟動子中-35區域的一段共同序列TTGACA設計的，引物序列長18bp，5’端的前11bp是一段填充序列，無任何特異組成，接著是TTGACA序列，這17bp組成核心序列，隨后為3’端的1個選擇性堿基；所述反向引物是基于原核生物基因組中啟動子-10區域的一段保守序列TATAAT設計的，引物序列長18bp，5’端的前11bp是一段填充序列，無任何特異組成，接著是TATA序列，這15bp組成核心序列，隨后為3’端的3個選擇性堿基。

3.如權利要求2所述的基于RNA聚合酶結合位點的原核生物分子標記方法，其特征在于，所述正向引物序列為：5’GACTGCGTACGTTGACAN3’，N＝A/T/G/C；所述反向引物序列為：5’GACTGCGTACGTATANNN?3’，N＝A/T/G/C。

4.如權利要求1～3任一所述的基于RNA聚合酶結合位點的原核生物分子標記方法，所述降落PCR擴增的條件為：94℃變性3min，然后按94℃變性30s、56℃退火45s、72℃延伸90s進行20個循環，每個循環退火溫度降低1℃，退火溫度降到36℃；再按94℃變性30s、36℃退火45s、72℃延伸90s進行15個循環，最后在72℃延伸10min，4℃保存。