[發(fā)明專利]一種腎綜合征出血熱雙價(jià)疫苗及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110426171.7
• 申請(qǐng)日: 2011-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN102618504A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊占秋;凌佳馨;李金林;魯力;張一卉;劉東瀛;劉媛媛;羅凡;熊海蓉;侯煒;肖紅;王繼麟;張?jiān)?/a>
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 薛玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及到一種新的漢坦病毒（Hantavirus），以及由該病毒制備的腎綜合征出血熱的雙價(jià)疫苗，本發(fā)明還涉及該疫苗的制備方法。?

背景技術(shù)

腎綜合征出血熱（hemorrhagic?fever?with?renal?syndrome,?HFRS）是由漢坦病毒（Hantaviruses）引起的經(jīng)嚙齒類動(dòng)物傳播的自然疫源性疾病，具有地區(qū)性、爆發(fā)性、周期性、易變性的流行特點(diǎn)。我國HFRS疫區(qū)已從80年代600多個(gè)縣市擴(kuò)大到現(xiàn)在1300多個(gè)縣市，疫區(qū)類型亦發(fā)生改變；在國外，新型疫區(qū)也在不斷擴(kuò)大和演變。人通過氣溶膠吸入、傷口、消化道等途徑感染病毒而發(fā)病。該病死亡率高，危害性大。我國是漢坦病毒感染影響最嚴(yán)重的國家，在過去十年中每年報(bào)道的HFRS病例達(dá)到25,000至60,000例，占世界發(fā)病人數(shù)的90％以上。疫苗預(yù)防是目前唯一有效控制HFRS的手段。1978?年韓國李鎬汪首先分離到HFRS?病毒后，我國自1981～1982?年先后從黑線姬鼠和褐家鼠體內(nèi)分離到HFRS?病毒，各地亦從不同動(dòng)物和人體分離到許多病毒株。對(duì)HFRS疫區(qū)病毒型別進(jìn)行鑒定，80年代前為漢灘型（HTN型）疫區(qū)，之后又出現(xiàn)漢城型（SEO型）且兩型并存，2003年又報(bào)道有普馬拉型（PUU型）出現(xiàn)。病毒的成功分離為疫苗的開發(fā)奠定了基本條件，我國已批準(zhǔn)生產(chǎn)的滅活疫苗包括地鼠腎細(xì)胞疫苗（Ⅱ型，SEOV，L99株）、沙鼠腎細(xì)胞疫苗（Ⅰ型，HTNV，Z10株）、純化鼠腦細(xì)胞疫苗（Ⅰ型，HTNV，LR1株）三種單價(jià)疫苗和雙價(jià)（Ⅰ、Ⅱ型）沙鼠腎細(xì)胞疫苗相繼初步研制成功。這4種疫苗的三期臨床觀察，在防治和控制HFRS上起到了重要的作用。然而，疫苗所用病毒來自早期分離獲得，以Ⅰ型HFRS疫苗毒種Z10和?LR1為例，分別分離自?1982年浙江省HFRS疫區(qū)病人血清和1983年捕獲于陜西省疫區(qū)黑線姬鼠肺組織，是否作為疫苗株病毒合適，并未證明，病毒的遺傳背景亦不清楚，也并非針對(duì)近年來HFRS流行的優(yōu)勢(shì)疫苗株。?

漢坦病毒屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬，其基因組由大（L）、中（M）、小（S）三個(gè)單股負(fù)鏈的RNA組成，分別編碼RNA多聚酶，兩個(gè)包膜蛋白（G1?和G2）和核蛋白（N），其中以M基因所承受的來自HV感染宿主的免疫壓力最大，變異最顯著。在不同型的漢坦病毒中，其S片段3′NCR區(qū)?核苷酸序列除手柄狀部分外，其余部分差異亦較大。漢坦病毒極易發(fā)生變異，存在不同型別及亞型之間。若變異引發(fā)病毒毒力即致病性的改變，則現(xiàn)有疫苗可能失去保護(hù)性效果，導(dǎo)致新疫區(qū)的不斷出現(xiàn)和擴(kuò)大，并出現(xiàn)HFRS的爆發(fā)流行。此外，以上這些疫苗株生物特性的分子學(xué)基礎(chǔ)研究，如基因組測(cè)定、分析和與國內(nèi)毒株親緣關(guān)系的比較等，都是在疫苗臨床使用后才進(jìn)行。可以說明這些疫苗株的代表性不強(qiáng)，因此，要控制HFRS流行就必須對(duì)HFRS流行與演變的規(guī)律及本質(zhì)有足夠的認(rèn)識(shí)，同時(shí)必須明確流行高峰期的優(yōu)勢(shì)流行病毒株的本質(zhì)，才能制備出更具有針對(duì)性、預(yù)防效果更好的疫苗。?

本發(fā)明在獲得湖北地區(qū)1985～2000年HFRS患者體內(nèi)漢坦病毒的M基因特征的基礎(chǔ)上，擬用RT-PCR、核苷酸測(cè)序等技術(shù)進(jìn)一步分析長江中下游地區(qū)1985～2009年間鼠源、螨源及人源漢坦病毒的S、M片段高變區(qū)基因變異頻率與變異位點(diǎn)，從而明確流行高峰期的優(yōu)勢(shì)流行病毒株的特征。在此基礎(chǔ)上，分離得到流行高峰期的優(yōu)勢(shì)流行病毒株并大規(guī)模培養(yǎng)，最終獲得這一地區(qū)具有代表性腎綜合征出血熱疫苗毒株。然后對(duì)病毒進(jìn)行滅活、超濾和濃縮，經(jīng)層析純化，鑒定獲得滅活疫苗，并進(jìn)行疫苗原液、疫苗的效力和其他常規(guī)項(xiàng)目的檢測(cè)以及疫苗免疫原性、安全性和保護(hù)性的評(píng)價(jià)，完成疫苗生產(chǎn)的臨床前研究。本發(fā)明可為制訂HFRS的防治方案，控制該病的流行和漢坦病毒疫苗的研制策略提供新的理論依據(jù)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種新型漢坦病毒，以及由該病毒制備滅活疫苗，用于腎綜合征出血熱的防治。?

本發(fā)明的另一目的在于提供一種包括上述漢坦病毒的雙價(jià)疫苗。?

本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供上述疫苗的制備方法。?

本發(fā)明人通過采集自長江中下游地區(qū)1985～2009年鼠源、螨源、人源的漢坦病毒標(biāo)本，對(duì)其S、M基因進(jìn)行核苷酸序列分析，獲得漢坦病毒基因變異情況，進(jìn)一步篩選得到優(yōu)勢(shì)病毒疫苗株HV004，該病毒已于2011年12月7日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址：武漢市武昌珞珈山郵編：430072)保藏，分類命名為漢坦病毒屬(Hantavirus)漢灘型，保藏號(hào)為CCTCC?No.v201139。?