[發明專利]一種八肽菌素及其制備與應用

無效

• 申請號: 201110425969.X
• 申請日: 2011-12-16
• 公開（公告）號: CN102558307A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 吳雪昌;錢朝東;滕毅;李歐;趙文鵬
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07K7/62
• 分類號: C07K7/62;C12P21/04;C07K1/22;A61K38/12;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

(一)技術領域

本發明涉及一種新的多粘菌素類似物——八肽菌素及其制備與應用。

(二)背景技術

幾乎對所有抗生素均耐藥的病原菌的出現，使人類健康正面臨一個日益嚴重的巨大威脅。雖然，多重耐藥革蘭氏陽性和陰性細菌對公眾衛生都是一個嚴峻考驗，但是后者的問題目前看來要嚴重的多。一方面，革蘭氏陰性菌正成為當前醫院和社區感染的一類主要致病菌，且臨床分離菌株耐藥性呈日益上升趨勢，特別是銅綠假單胞菌、鮑氏不動桿菌以及克雷伯氏菌這些醫院感染的重要條件致病菌，極易變異為對幾乎所有抗生素均耐藥的超級病原菌，從而嚴重影響人類健康。據報道，我國重癥監護室內的細菌感染率逐漸增高，其中70％以上的感染是由上述三種革蘭氏陰性菌引起的。

另一方面，近年來盡管針對多重耐藥革蘭氏陽性菌已開發出不少新藥，但是除替加環素外，卻沒開發出一種適用于治療革蘭氏陰性菌，特別是針對上述超級耐藥菌引起的全身性感染用新藥，而且即使未來十年也難有此類新藥出現。正因為如此，美國傳染病學學會(IDSA)將銅綠假單胞菌、鮑氏不動桿菌以及克雷伯氏菌列為6種最需優先應對的危險多重耐藥微生物之列。目前，多粘菌素是治療這些對其它所有抗生素均耐藥的革蘭氏陰性細菌，特別是銅綠假單胞桿菌感染的最后防線。

多粘菌素類抗生素發現于50年前，其中多粘菌素B和E曾在上世紀六、七十年代應用于臨床治療，后因腎毒性和神經毒性較大而停用；九十年代因對革蘭氏陰性耐藥菌有效，又重新起用。隨著多重耐藥革蘭氏陰性菌所致的重癥感染日漸增多，同時又缺乏能對抗這種感染的新型抗生素，促使人們對多粘菌素類抗生素進行重新評價。據對1950年至2005年間的研究資料統計分析表明，和早期的研究資料相比，近期研究顯示多粘菌素所致腎毒性明顯減少，即便有，其嚴重程度也較低。而且，多粘菌素所致的神經毒性作用也多較輕微，停藥后即可消退。

盡管，新的證據顯示多粘菌素的毒性沒有以往報告中所說的那么嚴重，但是其機會性毒性，特別是腎毒性常導致治療的復雜化甚至停藥。因此，有必要加快開發高效、低毒的新型多粘菌素類似物以應對日益嚴重的革蘭氏陰性桿菌耐藥性問題。

(三)發明內容

本發明的目的是提供一種新的針對革蘭氏陰性桿菌、具有醫療應用潛在價值的多粘菌素類似物——八肽菌素及其制備方法與應用。

本發明采用的技術方案是：

一種八肽菌素，結構如式(I)所示：

其中L-Dab為L型2，4-二氨基丁酸，D-Dab為D型2，4-二氨基丁酸，D-Phe為D型苯丙氨酸，L-Leu為L型亮氨酸。

該化合物相關參數如下：

外觀：凍干后為白色粉末；

分子量：1030；

分子式：C₅₀H₈₇N₁₃O₁₀；

MS圖譜：見圖1；

MS-MS圖譜：見圖2。

根據上述特性，可推斷該化合物為多粘菌素家族中的新成員，將其命名為八肽菌素。該化合物是國內外首次從類芽孢桿菌中分離到的又一新脂肽類抗生素。該化合物對所有測試過的革蘭氏陰性菌均具有顯著的抑制作用，動物實驗表明，該化合物對大腸桿菌感染的小鼠具有良好的保護作用。

本發明還涉及所述的八肽菌素的制備方法，所述方法包括：將類芽孢桿菌(Paenibacillus?tianmuensis)CCTCC?No：M?209149(菌株編號F6-B70)接種至適用于類芽孢桿菌的發酵培養基，于28～32℃下培養72～120h，發酵液離心取上清液，上清液經常規分離純化得到所述多肽菌素。

所述類芽孢桿菌F6-B70保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國.武漢.武漢大學，430072，保藏日期2009年7月14日，保藏編號CCTCC?No：M?209149，已在在先中國專利200910153060.6(公開號CN101709058A)中作為新菌株保護。

所述分離純化方法可選擇本領域常規適用多粘菌素的方法，本發明中分離純化如下：上清采用大孔吸附樹脂進行固相萃取，先用蒸餾水和10～30％(優選25％)甲醇水溶液沖洗，然后用40～90％(優選80％)甲醇水溶液洗脫，收集活性洗脫液成分，濃縮蒸干得到粗品；粗品用甲醇溶解，離心過濾先用C-18固相萃取柱進一步純化，然后進行高效液相色譜層析，收集活性組分，濃縮蒸干即可得到所述八肽菌素。