[發明專利]一種雙鏈核苷酸序列、含其的重組質粒及其構建方法

有效

• 申請號: 201110425807.6
• 申請日: 2011-12-16
• 公開（公告）號: CN102533742A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 盛望;陳學斌;周邵梅;曾毅;李澤琳
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;C12N15/64
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 李渤;張偉

1.一種雙鏈核苷酸序列，所述核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸序列分別如式1和式2所示：

5’-(X)_n1GAGACC(X)_n2TTTAAA(X)_n3GGTCTC(X)_n4-3’

式1

5’-(Y)_n5GAGACC(Y)_n6TTTAAA(Y)_n7GGTCTC(Y)_n8-3’

式2

其中，所述式1中的X為選自A、T、C或G，n1為1至20的整數，n2為1至20的整數，n3為1至20的整數，n4為1至20的整數，條件是(X)_n1、(X)_n2、(X)_n3或(X)_n4均不包含GAGACC、TTTAAA或GGTCTC；

所述式2中的Y為選自A、T、C或G，n5為1至20的整數，n6為1至20的整數，n7為1至20的整數，n8為1至20的整數，條件是(Y)_n5、(Y)_n6、(Y)_n7或(Y)_n8均不包含GAGACC、TTTAAA或GGTCTC；并且

n2＝n7，(X)_n2與(Y)_n7互補；n3＝n6，(X)_n3與(Y)_n6互補。

2.根據權利要求1所述的雙鏈核苷酸序列，其特征在于，n2和n7為6至20的整數；n3和n6為6至20的整數；

優選地，所述(X)_n1為TGCTG，所述(X)_n4為A；

優選地，所述(Y)_n5為CCTGT，所述(Y)_n8為C。

3.根據權利要求1或2所述的雙鏈核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示。

4.根據權利要求1或2所述的雙鏈核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示。

5.根據權利要求1或2所述的雙鏈核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示。

6.一種重組質粒，所述重組質粒包含根據權利要求1至5中任一項所述的雙鏈核苷酸序列。

7.根據權利要求5所述的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒為pcDNA6.2-EmGFP-PL。

8.根據權利要求5或6所述的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒為pcDNA6.2-EmGFP-PL1，序列如SEQ?ID?NO.7所示。

9.根據權利要求5或6所述的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒為pcDNA6.2-EmGFP-PL2，序列如SEQ?ID?NO.8所示。

10.根據權利要求5或6所述的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒為pcDNA6.2-EmGFP-PL3，序列如SEQ?ID?NO.9所示。

11.一種構建根據權利要求6至10中任一項所述的重組質粒的方法，所述方法包括：

1)分別合成如權利要求1至5中任一項所述的雙鏈核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸序列，然后使兩條單鏈核苷酸序列退火形成所述雙鏈核苷酸序列；以及

2)將經步驟1)得到的雙鏈核苷酸序列插入到質粒中，以形成所述重組質粒。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述步驟2)包括：

連接經步驟1)得到的雙鏈核苷酸序列與經線性化的質粒，將獲得的連接產物轉化宿主細胞，然后從宿主細胞獲得所述重組質粒。