[發明專利]抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 201110424728.3
• 申請日: 2011-12-16
• 公開（公告）號: CN102512671A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 陳亮;董艷美;汪衛;郭小玲;張國廣;郭遲鳴
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: A61K39/135
• 分類號: A61K39/135;A61P31/14;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/42;C12N7/04
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

1.抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗，其特征在于具有SEQ?ID?NO.1所示的構成抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗的氨基酸序列，可以利用大腸桿菌表達，且能夠在大腸桿菌細胞內自主包裝為類病毒顆粒結構，以類病毒顆粒形成存在。

2.如權利要求1所述的抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗，其特征在于所述氨基酸序列包含有MS2外殼蛋白及O型口蹄疫病毒的VP1上優勢抗原決定簇序列。

3.如權利要求1所述的抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗，其特征在于所述構成抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗的氨基酸序列是由SEQ?ID?NO.2所示的DNA序列編碼，所述DNA序列包含MS2的成熟酶蛋白基因、外殼蛋白基因和O型口蹄疫病毒的VP1上的優勢抗原決定簇基因序列。

4.如權利要求1所述的抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗，其特征在于所述構成抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗的氨基酸序列是將O型口蹄疫病毒VP1的第141～160位優勢抗原決定簇氨基酸插入到噬菌體MS2外殼蛋白的第15位氨基酸后面。

5.如權利要求3所述的抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗，其特征在于所述SEQ?ID?NO.2DNA序列的第1254～1316位核苷酸為O型口蹄疫病毒的VP1的第141～160位抗原決定簇氨基酸對應的核苷酸。

6.一種原核表達載體28a-CP-VP1，其特征在于含有包含MS2的成熟酶蛋白基因、外殼蛋白基因和O型口蹄疫病毒的VP1上的優勢抗原決定簇基因序列的DNA序列，或含有與包含MS2的成熟酶蛋白基因、外殼蛋白基因和O型口蹄疫病毒的VP1上的優勢抗原決定簇基因序列的DNA序列不完全同源，但能夠翻譯出所述SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列的DNA序列。

7.一種能夠用于蛋白表達的宿主細胞，其特征在于所述能夠用于蛋白表達的宿主細胞是所述表達載體轉化的宿主細胞，所述表達載體是含有包含MS2的成熟酶蛋白基因、外殼蛋白基因和O型口蹄疫病毒的VP1上的優勢抗原決定簇基因序列的DNA序列，或含有與包含MS2的成熟酶蛋白基因、外殼蛋白基因和O型口蹄疫病毒的VP1上的優勢抗原決定簇基因序列的DNA序列不完全同源，但能夠翻譯出所述SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列的DNA序列。

8.如權利要求1所述抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)將MS2的成熟酶蛋白和插入了O型口蹄疫病毒的抗原決定簇第141-160位氨基酸基因片段的外殼蛋白基因片段一起連接到pET28a表達載體中，核心序列見SEQ?ID?NO.2所示的DNA序列；

2)將步驟1)的DNA序列連接于表達載體的可表達區，形成類病毒顆粒疫苗的表達載體；

3)將步驟2)獲得的表達載體轉入表達宿主細胞，形成能表達類病毒顆粒疫苗的重組細胞；

4)利用LB液體培養基培養重組工程菌，通過添加ITPG誘導重組細胞表達并自主包裝成類病毒顆粒結構；

5)通過離心，收集經過誘導表達的重組工程菌，反復凍融菌體，超聲波破碎菌體，離心，上清即為含類病毒顆粒疫苗的產物；

6)將步驟5)所得的含類病毒顆粒疫苗的產物上清中加入固體NaCl，冰浴，離心，所得的上清中再加入PEG8000，冰浴，離心得到類病毒顆粒沉淀，沉淀經氯仿洗滌后再經過蔗糖梯度離心得到類病毒顆粒的純化產物，即為抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗。

9.如權利要求8所述抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗的制備方法，其特征在于在步驟4)中，所述培養重組工程菌，是在37℃搖床中，以200r/min的轉速培養重組工程菌；所述ITPG可采用1mM的ITPG；在步驟5)中，所述反復凍融菌體可反復凍融菌體3次；所述離心的條件可為15000r/min離心15min；在步驟6)中，所述加入NaCl至終濃度1mol/L；所述冰浴的時間可為1h，所述PEG8000的終濃度可為10％。

10.如權利要求1所述抗O型口蹄疫的類病毒顆粒疫苗用于與弗氏佐劑或其它免疫佐劑混合后通過肌肉注射途徑對動物進行免疫。