[發明專利]轉錄激活因子IE1

有效

• 申請號: 201110423279.0
• 申請日: 2011-12-16
• 公開（公告）號: CN102517301A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 夏慶友;王峰;徐漢福;馬三垣;趙萍;向仲懷
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/34
• 分類號: C12N15/34;C12N15/10;C12N15/63;C12N15/85;C12N15/66
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.轉錄激活因子IE1，其特征在于，如SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列。

2.轉錄激活因子IE1的制備方法，其特征在于：以家蠶BmNPV基因組作為模板，設計特異性上游引物F:?5'CGCggatccATGACGCAAATTAATTTTAA3'和下游引物為R:5'?ATTTgcggccgcTTAATTAAATTCAA3'，利用PCR擴增，得轉錄激活因子IE1。

3.根據權利要求2所述的轉錄激活因子IE1的制備方法，其特征在于：擴增條件為：94℃預變性4分鐘，94℃變性30秒，55℃退火30秒，72?℃延伸90秒，共30個循環,?最后72?℃延伸10?min。

4.含有權利要求1所述轉錄激活因子IE1的重組載體。

5.根據權利要求4所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體含有轉錄激活因子IE1和終止子SV40，所述轉錄激活因子IE1下游的NotI酶切位點與終止子SV40上游的NotI酶切位點連接。

6.根據權利要求4所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體為pBac[3xp3-Red,Pser1IE1sv40]，所述重組載體以pBac[3xp3Redaf]轉基因家蠶表達載體為骨架，依次連接以眼神經組織特異啟動子3xp3及其驅動的紅色熒光蛋白基因Red，如SEQ?ID?NO:5為核苷酸序列的絲膠I基因啟動子，IE1作為目的基因和sv40轉錄終止子。

7.權利要求4所述的重組載體的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

A?中間載體psl1180[Pser1IE1sv40]的構建

將如SEQ?ID?NO:5所示的啟動子Pser1、如SEQ?ID?NO:1所示的轉錄激活因子IE1以及轉錄中止信號sv40依次連接至pSLfa1180fa載體載體上，形成psl1180[Pser1IE1sv40]；所述啟動子Pser1的上游酶切位點為SalI，下游酶切位點為BamHI，所述轉錄激活因子IE1的上游酶切位點為BamHI，下游酶切位點為NotI，所述轉錄中止信號sv40的上游酶切位點為NotI，下游酶切位點為HindIII；

?B?重組載體的構建

將步驟A所得的psl1180[Pser1IE1sv40]用AscI酶切后，同經AscI酶切的轉基因骨架載體pBac[3xp3-Redaf]的連接，得重組載體pBac[3xp3-Red,Pser1IE1sv40]。

8.權利要求1所述的轉錄激活因子IE1在家蠶中制備重組外源蛋白的應用。