[發明專利]谷氨酸脫氫酶的一種提取方法

無效

• 申請號: 201110422831.4
• 申請日: 2011-12-16
• 公開（公告）號: CN102409030A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 高聚霞
• 申請（專利權）人: 西藏金稞集團有限責任公司
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.谷氨酸脫氫酶的一種提取方法，其特征在于：以動物肝臟為原料提取獲得谷氨酸脫氫酶粗酶液，依次經酸沉淀、硫酸銨鹽析、磷酸鈣凝膠吸附、透析、柱層析及冷凍干燥后獲得谷氨酸脫氫酶成品。

2.如權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶的一種提取方法，其特征在于動物肝臟包括豬、牛、羊、雞等畜禽。

3.如權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶的一種提取方法，其特征在于粗酶制備工藝為：稱取定量動物新鮮肝臟，在高速組織搗碎機中搗碎10分鐘(2000rmp)，加入0.05M，pH?7.6磷酸鹽緩沖液(內含0.15M?NaCl)，充分攪拌，置4℃冰箱中過夜抽提，8000rmp離心20分鐘，收集上清液獲得粗酶液，其中加入的磷酸緩沖液體積為動物肝臟的3～5倍。

4.如權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶的一種提取方法，其特征在于：酸沉淀工藝為：谷氨酸脫氫酶粗酶液用10％酸溶液調節pH，4℃放置1小時(期間緩慢攪拌數次)，8000rmp離心15分鐘，沉淀用0.1M?pH值7.6磷酸緩沖液溶解，其中10％的酸溶液可以為甲酸、乙酸、鹽酸，pH值調節為4.5～4.8。

5.如權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶的一種提取方法，其特征在于：硫酸銨鹽析工藝為：

第一次鹽析：在室溫下將酸沉淀定量樣品慢慢加入固體(NH₄)₂SO₄到29％飽和度，4℃過夜，8000rmp離心10分鐘。

第二次鹽析：取29％(NH₄)₂SO₄鹽析后的上清液定量，加固體(NH₄)₂SO₄到48％飽和度，4℃過夜，離心，沉淀溶解在pH?7.6的磷酸緩沖液中。

第三次鹽析：在48％硫酸銨飽和度鹽析沉淀溶解液中加(NH₄)₂SO₄至49％飽和度，沉淀溶解在pH?7.6磷酸鹽緩沖液中。

6.如權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶的一種提取方法，其特征在于：磷酸鈣凝膠吸附工藝為：取定量49％硫酸銨鹽析沉淀溶解液按比例加Ca₃(PO₄)₂凝膠，充分攪拌，4℃冰箱過夜，得上清液，其中硫酸銨鹽析液同磷酸鈣凝膠的比例為1∶0.25～1∶0.5(v/w)。

7.如權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶的一種提取方法，其特征在于：柱層析工藝為：磷酸鈣凝膠吸附溶液4℃透析后，濃縮上樣，用磷酸緩沖液(0.05mol/L，pH?7.6)進行洗脫，流速18mL/h，每管收集3mL；測定谷氨酸脫氫酶活性，收集活性較高的各管酶液，濃縮后冷凍干燥，制備獲得谷氨酸脫氫酶產品，其中柱層析選用柱料為Sephadex?G-150或Sephadex?G-25。

8.如權利要求1所述的谷氨酸脫氫酶的一種提取方法，其特征在于：制備獲得的谷氨酸脫氫酶產品的比酶活高于7900U/mg，酶活回收率高于17％。