[發明專利]一種藍鰭、大目和黃鰭金槍魚生魚片的PCR鑒定方法無效
| 申請號： | 201110422249.8 | 申請日： | 2011-12-16 |
| 公開（公告）號： | CN102559874A | 公開（公告）日： | 2012-07-11 |
| 發明（設計）人： | 王聯珠;姚琳;江艷華;朱文嘉;翟毓秀;宋春麗;李燁;李曉慶 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院黃海水產研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京中偉智信專利商標代理事務所 11325 | 代理人： | 張岱 |
| 地址： | 266071 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 金槍魚 生魚片 pcr 鑒定 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種藍鰭、大目和黃鰭金槍魚生魚片的PCR鑒定方法，其特征在于包括以下步驟：
1)提取金槍魚生魚片DNA；
2)以提取的DNA為模板，以F1/F2為引物，PCR擴增COI基因片段，其中F1：5-CACAAAGACATTGGCACCCT-3；
F2：5-CCTCCTGCAGGGTCAAAGAA-3；
3)瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增片段，將650bp的目的條帶切下純化，將純化后的PCR產物測序；
4)PCR產物測序結果通過NCBI網站在線提供的BLSAT軟件，確定金槍魚生魚片來源魚的屬(Genus)；
5)確定屬(Genus)后，再通過分析COI擴增片段的種特異性核酸位點確定金槍魚生魚片來源魚的品種(Species)，即藍鰭金槍魚的COI基因擴增片段的第337個堿基為胸腺嘧啶T，第508個堿基為鳥嘌呤G，大目金槍魚和黃鰭金槍魚在上述兩個位點均為胞嘧啶C；大目金槍魚COI基因擴增片段的第400個堿基為胞嘧啶C或者鳥嘌呤G，藍鰭金槍魚和黃鰭金槍魚魚在該位點均為胸腺嘧啶T。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的PCR反應條件為：
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的瓊脂糖凝膠電泳檢測所用的凝膠濃度為0.8％。
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