[發(fā)明專利]一種藍(lán)鰭、大目和黃鰭金槍魚生魚片的PCR鑒定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110422249.8
• 申請(qǐng)日: 2011-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN102559874A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王聯(lián)珠;姚琳;江艷華;朱文嘉;翟毓秀;宋春麗;李燁;李曉慶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京中偉智信專利商標(biāo)代理事務(wù)所 11325
• 代理人: 張岱

1.一種藍(lán)鰭、大目和黃鰭金槍魚生魚片的PCR鑒定方法，其特征在于包括以下步驟：

1)提取金槍魚生魚片DNA；

2)以提取的DNA為模板，以F1/F2為引物，PCR擴(kuò)增COI基因片段，其中F1：5-CACAAAGACATTGGCACCCT-3；

F2：5-CCTCCTGCAGGGTCAAAGAA-3；

3)瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增片段，將650bp的目的條帶切下純化，將純化后的PCR產(chǎn)物測序；

4)PCR產(chǎn)物測序結(jié)果通過NCBI網(wǎng)站在線提供的BLSAT軟件，確定金槍魚生魚片來源魚的屬(Genus)；

5)確定屬(Genus)后，再通過分析COI擴(kuò)增片段的種特異性核酸位點(diǎn)確定金槍魚生魚片來源魚的品種(Species)，即藍(lán)鰭金槍魚的COI基因擴(kuò)增片段的第337個(gè)堿基為胸腺嘧啶T，第508個(gè)堿基為鳥嘌呤G，大目金槍魚和黃鰭金槍魚在上述兩個(gè)位點(diǎn)均為胞嘧啶C；大目金槍魚COI基因擴(kuò)增片段的第400個(gè)堿基為胞嘧啶C或者鳥嘌呤G，藍(lán)鰭金槍魚和黃鰭金槍魚魚在該位點(diǎn)均為胸腺嘧啶T。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的PCR反應(yīng)條件為：

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的瓊脂糖凝膠電泳檢測所用的凝膠濃度為0.8％。