[發明專利]多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡

無效

• 申請號: 201110422050.5
• 申請日: 2011-12-16
• 公開（公告）號: CN103163297A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 王哲
• 申請（專利權）人: 王哲;霍春輝;哈峰
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡，該檢測卡包括：

a)樣品處理液A，其含有熒光素標記的待測抗原和熒光素標記的對照；

b)處理液B，其含有生物素標記的針對待測抗原的單克隆抗體；

c)檢測卡，其包括檢測線區域和質控線區域，所述檢測線區域固定有親和素，所述質控線區域固定有針對所述對照的抗體。

2.根據權利要求1所述的多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡，其中所述待測抗原濃度為1～100ng/ml，所述對照終濃度為1～20ng/ml，所述單克隆抗體終濃度為5～50μg/ml。

3.根據權利要求1或2所述的多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡，其中所述對照是兔抗，針對所述對照的抗體是羊抗兔抗體。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡，其中所述待測抗原包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、三聚氰胺。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡，其中所述熒光素包括FITC、羅丹明、Alexa?Fluor熒光標記物系列。

6.根據權利要求1-5中任意一項所述的多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡，其中所述待測抗原包括小分子抗原和半抗原。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述的多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡在食品安全檢測中的應用。

8.一種通過權利要求1-6中任意一項所述的多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡檢測樣本中待測抗原的方法，其包括下述步驟：

i)將待測樣本加入樣品處理液A中，然后再在樣本處理液中加入樣本處理液B，得到混合液，其中，待測樣本中的抗原與處理液A中所述熒光素標記的待測抗原相互競爭與處理液B中所述單克隆抗體結合形成抗原抗體復合物，樣本中待測抗原濃度越高，則處理液A中所述熒光素標記的待測抗原與處理液B中所述單克隆抗體結合的量越少；

ii)將i)中得到的混合液滴加在檢測卡中，所述抗原抗體復合物通過層析作用依次通過質控線區域、檢測線區域，生物素標記的單克隆抗體與檢測線區域的親和素結合，而混合液中的熒光素標記對照則被質控線的該對照的抗體捕獲；待測樣本中的抗原濃度越高，則熒光素標記的抗原與生物素標記的抗體量形成抗原抗體復合物的量就越少，檢測線上被親和素捕獲的熒光免疫復合物的量也就越少，待測樣本中抗原的濃度與檢測線信號成負相關；而質控線上捕獲的熒光素標記的對照的信號值則相對固定；

iii)通過熒光檢測儀對檢測卡進行掃描，根據抗原濃度與熒光信號成負相關，獲得待測樣本中抗原的準確濃度。

9.一種權利要求1-6中任意一項所述的多功能熒光免疫層析快速定量檢測卡的制備方法，其包括以下步驟：

i)制備熒光素標記的待測抗原、熒光素標記的對照、生物素標記的針對待測抗原的單克隆抗體；

ii)制備處理液A、處理液B；

iii)噴膜，其包括將親和素稀釋到0.5～2mg/ml，用噴膜儀定量噴在載體膜檢測線區域；

iv)將針對對照的抗體稀釋到0.5～2mg/ml，用噴膜儀定量噴在載體膜的質控線區域；質控線、檢測線的噴膜液量為0.5～2μl/cm；

v)大卡粘貼，在帶有背膠的底板上依次粘帖載體膜、樣品墊、吸水紙；

vi)干燥，將上述噴好試劑的大卡在恒溫烘箱或者烘房中烘干6～24小時；

vii)切條、裝卡，將干燥好的大卡用切條機或者滾刀切割成檢測卡，將切割好的檢測卡裝在塑料外殼中，并用鋁箔袋或塑料袋封裝，封裝袋中加入干燥劑。

10.根據權利要求9所述的制備方法，其中所述的載體膜為硝酸纖維素膜。