[發明專利]抗HIV的藥物靶點及其在制藥中的用途

無效

• 申請號: 201110421989.X
• 申請日: 2011-12-16
• 公開（公告）號: CN102516370A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 于曉方;張文艷;杜娟
• 申請（專利權）人: 吉林大學第一醫院
• 主分類號: C07K14/155
• 分類號: C07K14/155;C07K14/47;C07K16/10;C07K16/06;C12Q1/70;G01N33/53;A61K45/00;A61P31/18
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

技術領域

本發明公開了一種抗HIV的藥物靶點，同時還提供了該藥物靶點在制藥中的用途，屬于生物制藥技術領域。

背景技術

治療艾滋病的藥物目前臨床上市的藥物根據藥物作用靶點可分為以下幾類：病毒的吸附融合、逆轉錄酶、整合酶、蛋白酶已成為篩選和制備抗AIDS藥物的主要靶點，近十多年來的研制以及臨床治療主要是針對這幾個位點進行的。令人遺憾的是，雖然這些藥物可以抑制相應病毒蛋白的活性，但是在臨床治療中都存在種種不利因素如：用藥周期持久、長期使用后出現耐藥性、毒副作用、病患難以忍受疼痛、停藥后的病毒重活化（reactivation）、藥價昂貴、檢測技術和設備有限等。這些問題使通常使用的抗艾滋病藥物在治療過程中會受到不同程度的制約，而無法廣泛的應用。

對于HIV藥物的諸多缺陷，耐藥性是主要問題之一，即病毒可發生多次氨基酸突變而產生交叉耐藥導致抗病毒治療失敗。1996年，科研人員對此提出了“雞尾酒療法”（HAART，高效抗逆轉錄療法）的策略，即采用三種聯合用藥的方式治療AIDS。這種方法可以同時抑制HIV復制過程的多個環節，最大限度的降低耐藥性，降低HIV感染者發生AIDS的發病率和死亡率，在極大程度上改善了患者的預后生活質量。雖然數年的臨床治療后發現這種方法也存在一些不足如：藥物之間的相互作用、毒性的相加、產生HIV交叉抗藥性、用藥劑量大而且復雜、藥物對潛伏HIV無效等，但是HAART方法無疑是目前為止最為有效的AIDS治療手段，因此很多研究者已經開始著手解決其使用中存在的局限性。以長遠的戰略性眼光來看，最好的解決途徑就是徹底了解HIV-1病毒學特性和免疫機理，加速新型藥物及靶標的研制與開發，增添雞尾酒療法的配方，這也是未來艾滋病治療研究的一個主要方向與手段。

APOBEC3G蛋白是最新被發現的人體細胞內天然抗病毒因子，但是其抗病毒功能卻被HIV-1?Vif蛋白所拮抗。Vif能夠與宿主細胞內多種蛋白形成一個具有泛素蛋白連接酶功能的ECS復合物，導致APOBEC3G的泛素化并最終被體內蛋白酶體識別、降解，從而無法發揮抗病毒功能。探討Vif蛋白的作用機理對于設計抗艾滋病藥物具有重要的研究意義。

發明內容

本發明公開了一種抗HIV的藥物靶點，利用該靶點設計篩選出新的治療HIV的藥物。

本發明還提供了該藥物靶點在制藥中的用途，該藥物靶點的單克隆抗體和多克隆抗體及其制備方法以及潛在的新型病毒抑制劑。

本發明的技術解決方案如下：

通過分子克隆手段刪除了CBFβ的Helix4和Loop3，以及Vif的N端，或者是突變了Vif的第21位或Vif的第38位以及Vif第145、146及147位的氨基酸位點，通過免疫共沉淀方法檢測CBFβ和Vif結合能力明顯下降。

上述的HIV病毒藥物靶點的另一種優選方式為，通過分子克隆手段刪除了CBFβ的Helix4和Loop3，以及Vif的N端，或者是突變了Vif第21位氨基酸或Vif第38位以及Vif第145、146及147位的氨基酸位點，?HIV-1Vif降解APOBEC3G的能力下降。

本發明提供的HIV藥物靶點，其特征在于：

該藥物靶點針對病毒的Vif蛋白與宿主細胞CBFβ蛋白之間的相互結合位點；該結合位點包括CBFβ的Helix4和Loop3，以及Vif的N端。

所述的HIV病毒藥物靶點，優選位點是Vif第21位氨基酸或Vif第38位氨基酸。

本發明提供一種抗HIV-1病毒的多克隆抗體，其特征在于是以Vif?N端前98個氨基酸范圍內的多肽為抗原表位的多克隆抗體，具有抑制HIV-1?Vif和CBFβ結合的能力。

所述抗HIV-1病毒的多克隆抗體的制備方法，步驟包括：

1）提供序列在Vif??N端前98個氨基酸范圍內的多肽或序列以SLQ位點為抗原表位的多肽；

2）將多肽與載體蛋白偶聯，并與佐劑一起免疫動物；

3）取動物的抗血清，經過抗原偶聯的親和層析柱純化，即得所述多克隆抗體。

上述的這些抗體制備步驟并不是一成不變的，本領域的普通技術人員可以根據實際情況進行合理的修改使之符合應用要求。比如是否采用與載體蛋白偶聯，是否用親和層析方法純化等等。

本發明提供一種抗HIV-1病毒的單克隆抗體，其特征在于是以Vif?N端前97個氨基酸范圍內的多肽為抗原表位的單克隆抗體，具有抑制HIV-1?Vif和CBFβ結合的能力。

所述抗HIV-1病毒的單克隆抗體的制備方法，步驟包括：