[發明專利]一種魯斯考皂苷元單體的分離純化方法

有效

• 申請號: 201110420165.0
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102504007A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 文煥松;陳軍;夏柯;郭建華;劉丁
• 申請（專利權）人: 成都普思生物科技有限公司
• 主分類號: C07J71/00
• 分類號: C07J71/00
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙) 51211
• 代理人: 趙麗

技術領域

本發明涉及一種植物化合物單體的制備方法，具體涉及從麥冬的塊根中提取分離魯斯考皂苷元單體的方法，屬于中藥活性成分的分離純化技術領域。

背景技術

魯斯考皂苷元主要來源于百合科沿階草屬植物麥冬Ophiopogon?Japonicus（Thunb.)?Ker-Gawl.的干燥塊根，含多種甾體皂甙：麥冬皂甙A、B、C、D均具有抗心肌梗塞，增強心肌收縮力，增加冠脈流量等作用，甙元均為魯斯考皂苷元，具有明顯的抗血栓活性，能降低血清及組織的NO、MDA水平，保護各組織免受自由基攻擊，對心、肺作用更明顯并下調肺組織?TF基因表達，具有很好的藥用前景，但由于在原植物中魯斯考皂苷元極少以原型存在均是以皂苷形式存在，影響了其藥效發揮。

結構式：

目前主要采用柱層析及結晶等常規手段進行魯斯考皂苷元單體的分離純化，效率低，產量少，工藝不穩定，成本較高。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的缺陷，提供一種從麥冬中分離純化魯斯考皂苷元單體的方法。該方法操作簡便，生產周期短，分離效率高，工藝穩定，成本低廉，可實現工業化魯斯考皂苷元單體的高純度分離制備，得到的魯斯考皂苷元單體的純度達98％以上。

為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

一種魯斯考皂苷元單體的分離純化方法，包括下述主要步驟：

A、提取總皂苷：

取麥冬塊根藥材，粉碎成1-4mm的粗粉置于容器中，按藥材質量：溶液質量1Kg:?(6-10)L加入體積分數均為70-90%的甲醇或乙醇中，加熱回流提取3-5次，每次提取時間為1-3小時，過濾，濾液合并，并于60-90℃濃縮成相對密度為1.0-1.1的浸膏；

本步驟通過粉碎、加熱回流提取、減壓濃縮，所得的總皂苷浸膏中主要含有皂苷和黃酮等成分。

B、水解總皂苷：

將步驟A所得濃縮后的浸膏置于耐酸容器中，加入占浸膏體積1%-3%的濃硫酸攪拌，加熱至沸騰，保持沸騰水解1.5-3.5小時，放冷至室溫，濾布過濾，收集黑色固體物；

本步驟中，采用加酸加熱沸騰的方式將提取浸膏中的總皂苷水解為皂苷元，提高目標物的濃度。

C、提取總皂苷元：

于步驟B所得黑色固體物中加入體積百分比1-5%氫氧化鈉水溶液洗滌至中性，按固體質量：溶液體積為1Kg:?(8-12)L加入乙酸乙酯溶液，室溫浸泡提取3-5次，每次2-4小時，過濾，收集濾液，50-75℃減壓濃縮至干，再按固體質量：溶液體積1Kg：4L加入純甲醇使固體溶解，經孔隙為0.45微米的有機濾膜過濾，收集濾液；

本步驟通過乙酸乙酯提取、甲醇溶解、有機濾膜過濾，可進一步除去大部分雜質，純化魯斯考皂苷元。

D、通過制備型高效液相色譜分離魯斯考皂苷元單體：

取步驟C所得的濾液進樣，進行魯斯考皂苷元單體的制備分離，紫外檢測器在線監測針對性收集魯斯考皂苷元的制備餾分溶液，得魯斯考皂苷元單體溶液；

所述制備型高效液相色譜采用填料為C₁₈的色譜柱、流動相組成為：體積分數65-85%的甲醇水溶液。

所述紫外檢測器檢測波長為205nm。

本發明在進行高效制備液相色譜分離前，可通過液-質聯用或其它本技術領域常用的方法，如氣-質聯用、核磁共振碳譜、氫譜等確定高效液相色譜中魯斯考皂苷元單體的峰形。

以液-質聯用（HPLC-MS）方法為例，可采用填料為C₁₈的色譜柱，流動相組成為：體積分數65-85%的甲醇水溶液，柱溫為室溫，檢測波長為205nm，取步驟C所得的澄清透明濾液適量進樣，進行魯斯考皂苷元單體的HPLC-MS檢測，紫外檢測器在線監測，并根據質譜正離子檢測結果，確定魯斯考皂苷元單體在液相色譜中所對應的峰形及歸屬。由于制備型高效液相色譜分離魯斯考皂苷元單體也采用C₁₈色譜柱，且流動相組成相同，因而可用于推斷在制備型高效液相色譜中魯斯考皂苷元單體的出峰位置及峰形等。

E、干燥制備魯斯考皂苷元單體產品：

取步驟D所得魯斯考皂苷元單體溶液，于45℃-75℃減壓濃縮至干，再將固體物于45-85℃與另器盛放的五氧化二磷共存，真空干燥至恒重，收集干品，即得魯斯考皂苷元單體產品。