[發明專利]一種利用微生物催化制備(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇的方法

有效

• 申請號: 201110419992.8
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102559520A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 倪曄;周婕妤;孫志浩
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P17/12;C12R1/645
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一株具有高立體選擇性羰基還原酶活性的微生物菌株，其分類命名為克魯維假絲酵母（Kluyveromyces?sp.）JNU-KR1，現保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號：CCTCC?NO：M?2011385。

2.用微生物CCTCC?NO：M?2011385不對稱氧化還原制備(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇的方法，(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇簡寫(S)-CPMA，其特征是以CCTCC?NO：M?2011385全細胞為催化劑，在單一水相或雙水相反應體系中對潛手性4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮CPMK進行不對稱還原，制備具有高光學純度的(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇，步驟如下：

（1）濕菌體的培養：培養基組成以g/L計為：葡萄糖5－50，酵母膏3－30，磷酸二氫鉀?1－10，七水合硫酸鎂?0.2－2，pH4－9，發酵培養1－5天，發酵液過濾獲得濕菌體；

（2）配置反應體系：以4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮為底物，用磷酸鹽緩沖液配制成的單一水相反應體系，底物濃度為0.1-10?g/L，葡萄糖濃度10－100?g/L；或用不同分子量的PEG與不同無機鹽溶液配制成的各種雙水相反應體系，底物濃度為0.5－20?g/L，葡萄糖濃度10－100?g/L；

（3）酶轉化反應：在反應體系中加入CCTCC?NO：M?2011385濕菌體50-250?g/L，于25-45?℃進行酶反應，反應時間為3-72?h；

（4）轉化液后處理：用乙酸乙酯萃取轉化液，將萃取獲得的有機相蒸發回收溶劑，采用硅膠柱層析進一步分離純化，再干燥脫水，蒸發回收溶劑，獲得無色油狀液體產物(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于反應體系為由0.1－0.5?mmol/L、pH6－8?磷酸鹽緩沖液配制的單一水相體系，或由分子量為2000－20000的不同PEG?與KH₂PO₄、Na₂HPO₄、(NH₄)₂SO₄?或Na₂SO₄各種無機鹽配制的不同雙水相反應體系。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于酶轉化反應條件為：底物濃度為1－10?g/L，濕菌體濃度50－250?g/L，反應溫度25-35?℃，反應時間12－72?h。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于在質量濃度20%?PEG?4000?/質量濃度14%?Na₂HPO₄雙水相反應體系中，最終產物e.e.值達到85%，產率達到92%。