[發(fā)明專利]一種適配體修飾的納米銀及其試劑盒與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110419608.4
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102539738A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許丹科;李周敏;趙熙睿;李慧;魏霞
• 申請（專利權(quán)）人: 南京大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種適配體修飾的納米銀，其特征在于，它以直徑為10～30nm的納米銀球為內(nèi)核，銀球外表面鍵合有適配體鏈和寡核苷酸鏈；

其中，所述的適配體鏈為：5’-SH-AAAAAAAAAAAAAAA?GGGGC?ACGTT?TATCCGTCCC?TCCTA?GTGGC?GTGCC?CC；

其中，所述的寡核苷酸鏈為：5’-SH-AAAAAAAAAAAAAAA-生物素。

2.權(quán)利要求1所述的適配體修飾的納米銀的制備方法，其特征在于，它包括如下步驟：

(1)在冰浴條件下，將2-20mmol/L硝酸銀溶液逐滴加入至1-10倍體積量的3-30mmol/L硼氫化鈉溶液中，不斷攪拌至反應(yīng)完全，繼續(xù)攪拌至室溫，得到納米銀溶液；

(2)將適配體和寡核苷酸按摩爾比(1～99)∶(1～9)加入步驟(1)得到的納米銀溶液中，靜置4～48小時，適配體和寡核苷酸的總摩爾量與納米銀摩爾量之比為(1-1000)∶1；

所述的適配體，其核苷酸序列為：5’AAAAA?AAAAA?AAAAA?GGGGC?ACGTTTATCC?GTCCC?TCCTA?GTGGC?GTGCC?CC?3’，其5’端由巰基修飾；

所述的寡核苷酸，其核苷酸序列為：5’AAAAAAAAAAAAAAA?3’，其5’端由巰基修飾，3’端由生物素標記；

(3)向步驟(2)得到的混合體系中加入PBS緩沖溶液，靜置2～20小時，PBS緩沖溶液的加入體積為步驟(2)得到的混合體系體積的5～20％；

(4)向步驟(3)得到的混合體系中加入氯化鈉溶液，靜置1～10小時，重復加入氯化鈉溶液與靜置的步驟1～4次，氯化鈉溶液每次加入體積為待加入的混合體系體積的1～10％；

(5)將步驟(4)得到的混合體系靜置12～48小時，取上清液；

(6)將步驟(5)得到的上清液經(jīng)離心去除上清，取沉淀加入PBS緩沖溶液重懸，重復離心與重懸的步驟2～4次，PBS緩沖溶液每次的加入體積為待加入的混合體系體積的0.1～5倍；最后離心得到的沉淀用PBSM溶液重懸即得備用探針。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的適配體修飾的納米銀的制備方法，其特征在于，步驟(6)中，所述的離心條件為8000～20000rpm條件下離心10～30分鐘。

4.權(quán)利要求1所述的適配體修飾的納米銀在制備檢測IgE的試劑中的應(yīng)用。

5.一種用于檢測IgE的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含如下試劑：

磷酸鹽緩沖液、Tween-20、羊抗人IgE、鏈霉親和素、銀增強試劑A和銀增強試劑B、牛血清白蛋白溶液、適配體修飾的納米銀探針。

6.權(quán)利要求5所述的用于檢測IgE的試劑盒在檢測IgE中的應(yīng)用。