[發(fā)明專利]一種提高發(fā)酵法生產(chǎn)衣康酸生產(chǎn)強(qiáng)度的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110419336.8
• 申請(qǐng)日: 2011-12-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102517343A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉立明;高倩;劉杰;陳堅(jiān)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P7/44
• 分類號(hào): C12P7/44;C12R1/66
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種提高發(fā)酵法產(chǎn)衣康酸生產(chǎn)強(qiáng)度的方法，屬于發(fā)酵工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)

衣康酸(itaconic?acid)，又名亞甲基丁二酸，是一種用途極為廣泛的不飽和二元有機(jī)酸，由結(jié)構(gòu)式可以看出分子中有一個(gè)不飽和雙鍵和兩個(gè)活潑的羧基，并且碳碳雙鍵與一個(gè)羰基呈共軛關(guān)系，因此具有很強(qiáng)的反應(yīng)活性。利用它的兩個(gè)羧基，可以作為不飽和聚酯的單體；利用它的C-C雙鍵，可以與多種取代烯烴共聚，生成帶有羥基功能的高聚物，使得其在化學(xué)纖維、合成樹(shù)脂、塑料、橡膠、醫(yī)藥、涂料、表面活性劑、水處理、潤(rùn)滑油添加劑以及醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。衣康酸作為一種高科技、高利潤(rùn)、高創(chuàng)匯的化工產(chǎn)品，被譽(yù)為有機(jī)酸領(lǐng)域中皇冠上的寶石，發(fā)展前景看好。

衣康酸生產(chǎn)方法有發(fā)酵法和化學(xué)合成法兩類，由于發(fā)酵法生產(chǎn)工藝成熟，成本較低等優(yōu)點(diǎn)成為國(guó)內(nèi)外普遍采用的方法。自從1929年日本學(xué)者木下廣野首次發(fā)現(xiàn)微生物具有分泌衣康酸的能力后，有關(guān)微生物發(fā)酵糖類生產(chǎn)衣康酸的研究非常活躍，報(bào)道過(guò)具有產(chǎn)衣康酸能力的微生物有假絲酵母、紅酵母、查爾斯青霉、黑曲霉P1、土曲霉和衣康酸曲霉。衣康酸工業(yè)生產(chǎn)菌株主要是屬于土曲霉群的土曲霉和屬于灰綠曲霉群的衣康酸曲霉。

真菌發(fā)酵生產(chǎn)衣康酸在工業(yè)化生產(chǎn)及基礎(chǔ)研究中普遍存在周期較長(zhǎng)、生產(chǎn)強(qiáng)度較低的問(wèn)題。如何縮短發(fā)酵周期，提高生產(chǎn)強(qiáng)度目前仍沒(méi)有很好的解決方案。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種提高發(fā)酵法生產(chǎn)衣康酸生產(chǎn)強(qiáng)度的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案：使用篩選的土曲霉(Aspergillus?terreus?FMME?033)為生產(chǎn)菌株，在實(shí)驗(yàn)室條件下，利用單因素和正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進(jìn)行搖瓶發(fā)酵優(yōu)化。

菌種：實(shí)驗(yàn)室篩選的產(chǎn)衣康酸的土曲霉。

本發(fā)明的有益效果：利用本發(fā)明能夠有效提高衣康酸生產(chǎn)強(qiáng)度、縮短發(fā)酵周期。衣康酸的產(chǎn)量為65g/L，生產(chǎn)周期為48h，生產(chǎn)強(qiáng)度為1.35g/(L·h)，效果顯著。

本發(fā)明通過(guò)提供一種利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)衣康酸的策略，縮短發(fā)酵周期并提高生產(chǎn)強(qiáng)度，對(duì)今后發(fā)酵法生產(chǎn)衣康酸具有一定的指導(dǎo)意義。

具體實(shí)施方式

對(duì)照實(shí)施例：本發(fā)明所用菌種為實(shí)驗(yàn)室篩選的土曲霉(Aspergillus?terreus?FMME?033)。

先轉(zhuǎn)接斜面在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d，待孢子成熟后用無(wú)菌生理鹽水洗下，將孢子懸液調(diào)整孢子濃度OD₅₆₀為1.2后按1％接入基礎(chǔ)種子培養(yǎng)基中，在溫度37℃，轉(zhuǎn)速200rpm條件下培養(yǎng)36h，500mL搖瓶裝液量為100mL，對(duì)基礎(chǔ)種子培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵優(yōu)化確定培養(yǎng)基最佳組成；從最佳種子培養(yǎng)基中按10％接種量轉(zhuǎn)接至基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)120h，溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)速200rpm，500mL搖瓶裝液量為50mL，對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵優(yōu)化確定發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳組成。

斜面種子固體培養(yǎng)基(g/L)：

麥芽抽提物26.9，葡萄糖20，蛋白胨1，瓊脂20，pH自然。

基礎(chǔ)種子培養(yǎng)基(g/L)：

葡萄糖45，(NH₄)₂SO₄?2.67，MgSO₄·7H₂O?4，玉米漿1，初始pH?2.0。

基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：

葡萄糖150，(NH₄)₂SO₄?2.67，MgSO₄·7H₂O?5，玉米漿1.5，初始pH?2.0。

最佳種子培養(yǎng)基(g/L)：葡萄糖45，(NH₄)₂SO₄?5，MgSO₄·7H₂O?1，KH₂PO₄?1，F(xiàn)eSO₄·7H₂O0.04，ZnSO₄·7H₂O?0.03，玉米漿1，初始pH?3.0。