[發(fā)明專利]錳氧化微生物的分離、篩選方法

無效

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• 申請日: 2011-12-14
• 公開（公告）號: CN102517231A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設計）人: 王萬能
• 申請（專利權）人: 重慶理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，特別涉及一種錳的氧化微生物的篩選方法。

背景技術

金屬作為一種重要的材料在現代工業(yè)和日常生活中占據了極為重要的地位，但是也正是因為金屬的廣泛使用造成了現在日趨嚴重的水體和土壤的重金屬污染。重金屬污染的治理已經刻不容緩。以錳為例，它不僅在現代工業(yè)領域扮演著極其重要的角色，而且也是一種維持機體正常代謝的重要微量元素。在工業(yè)上，錳礦石廣泛應用于冶金、化工、玻璃、陶瓷等產業(yè)中。但錳元素作為一種重金屬元素，過多得攝入會嚴重危害機體的健康，我國生活飲用水衛(wèi)生標準規(guī)定錳含量不超過0.1mg/L，國家最低排放標準為2mg/L。我國很多地區(qū)(尤其是錳礦石開采和錳礦石加工周邊地區(qū))至今仍無法嚴格達到這一國家標準，亟待采取合理的方法來治理水土中的錳污染。

本發(fā)明以錳金屬污染為出發(fā)點，就轉化可溶性有毒的Mn(II)為不溶性無毒的Mn(III)和Mn(IV)過程中氧化微生物發(fā)揮的重要作用為契機，研究了氧化微生物的分離和鑒別的方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的，是提供一種錳的氧化微生物的篩選和分離方法，該方法可以將土壤中的重金屬錳離子如Mn(II)，通過生物氧化降低土壤中的重金屬錳離子的含量，利于降低重金屬錳如Mn(II)在土壤中的環(huán)境污染。

本發(fā)明的目的是這樣實現的：

錳氧化微生物的分離、篩選的方法有以下步驟：

1)取錳礦石表面物質，加去離子水攪拌，制成原菌懸液，將原菌懸液均勻涂布在固體PYCM培養(yǎng)基平板上；

2)在25～28℃恒溫下培養(yǎng)1～2天，挑取單菌落劃線純化，在固體PYCM培養(yǎng)基中25～28℃培養(yǎng)，得到錳氧化微生物待選菌株，在溫度為4℃條件下保藏；

3)步驟3)所得錳氧化微生物待選菌株，在液體PYCM培養(yǎng)基，光通量為630Lm，搖床轉速為150-230r/min，溫度為25-30℃，培養(yǎng)2-4天，測定培養(yǎng)液中錳離子的含量變化，篩選出錳氧化微生物。

培養(yǎng)基中將錳離子濃度降低的為錳氧化微生物，其中將錳離子濃度降得最低的為錳氧化微生物優(yōu)勢菌株。

步驟3)所述搖床轉速較好的為200r/min.

步驟3)所述溫度較好的為30℃。

所述固體PYCM培養(yǎng)基的成分和組成為：蛋白胨0.8g；酵母膏0.2g；MnSO₄·H₂O?0.2g；K₂HPO₄?0.1g；MgSO₄·7H₂O?0.2g；NaNO₃?0.2g；CaCl₂?0.1g；NH₄HCO₃?0.1g；加水1000mL，調pH值為6.8～7.2，固體培養(yǎng)基則加瓊脂1.8％。

所述液體PYCM培養(yǎng)基的成分和組成為：蛋白胨0.8g；酵母膏0.2g；MnSO₄·H₂O?0.2g；K₂HPO₄?0.1g；MgSO₄·7H₂O?0.2g；NaNO₃?0.2g；CaCl₂?0.1g；NH₄HCO₃?0.1g；加水1000mL，調pH值為6.8～7.2。

本發(fā)明方法有以下優(yōu)點：

(1)分離自錳礦區(qū)軟錳礦石表面的細菌群體中的細菌，可以將Mn(II)氧化為更高價態(tài)的Mn(III)和Mn(IV)。

(2)錳礦區(qū)軟錳礦石表面的細菌群體中的細菌在正常狀態(tài)下其錳氧化能力較強。

本發(fā)明所述方法可以將土壤中的重金屬錳離子如Mn(II)，通過生物氧化降低土壤中的重金屬錳離子的含量，使土壤中錳離子濃度降低65％，采用本發(fā)明方法可以降低能重金屬錳如Mn(II)在土壤中的環(huán)境污染。

下面結合實施例對本發(fā)明做進一步的說明，但本發(fā)明不僅限于這些例子。

附圖說明

圖1為I型和II型錳氧化微生物菌種，其中，a為I型錳氧化微生物菌種，b為II型錳氧化微生物菌種；

圖2為錳標準曲線圖。

具體實施方式

一.試劑和儀器

1.菌種來源

本實驗使用的錳氧化菌種來自于重慶市秀山縣(孝溪鄉(xiāng)細沙村，是否需要具體地址)錳礦地區(qū)軟錳礦石的表面。

2.實驗用培養(yǎng)基