[發明專利]芐嘧磺隆通用半抗原、人工抗原及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201110417904.0
• 申請日: 2011-12-14
• 公開（公告）號: CN103159648A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 王磊;睢珂;王志偉;潘家榮;趙杰;鄭月明
• 申請（專利權）人: 中國計量學院;中國農業科學院農產品加工研究所
• 主分類號: C07C311/51
• 分類號: C07C311/51;C07C303/40;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/06;C07K16/44;C12N5/20;G01N33/53
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

技術領域

本發明屬于免疫檢測及生物化工技術領域，涉及一種芐嘧磺隆通用半抗原、人工抗原及其制備方法與應用。

背景技術

磺隆類除草劑是目前世界上最大一類除草劑，自從杜邦公司1982年首次開發出麥田除草劑氯磺隆以后，通過在磺酰脲兩端及脲橋上進行修飾等衍生化方法，目前已有近40個品種商品化。磺隆類除草劑通過抑制乙酰乳酸合成酶(ALS)/乙酸羥酸合成酶(AHAS)，從而破壞蛋白質合成、干擾DNA合成和細胞分裂與生長，是雜草正常生長受到破壞而死亡^[1]。它因高效、用量少、毒性低及半衰時間短而廣泛應用于水稻、小麥、玉米等大田作物及花生、馬鈴薯等瓜果蔬菜^[2]。但是磺隆類化合物因不易揮發、不易光解、有機吸附系數低、隨土壤pH上升半衰期延長的特點，造成對當地農作物及環境的危害和損失事件頻繁報道及公眾環保和健康意識的提高也迫使我們要加強對其殘留的監測研究。歐盟已經對飲用水和果蔬中做出最低限量標準為0.05ppm。

傳統的磺隆類除草劑殘留檢測方法有氣相色譜、液相色譜和毛細管電泳等方法。氣相色譜法由于酰脲類揮發性低和熱不穩定需要衍生化；液相色譜配合質譜及固相微萃取等方法雖能對樣品中磺酰脲類除草劑進行靈敏準確檢測，國內外已有大量文獻研究報道，但有毒試劑應用且分析成本高昂；Menne?H?J等用毛細管電泳方法對土壤樣品中磺隆類除草劑進行分析研究發現，由于進樣量小，提取液需要高濃度濃縮，從而限制了毛細管電泳在毒物分析中的應用(GARCIA?F，HENION?J.Fast?capillary?electrophoresis-ion?spray?mass?spectrometric?determination?of?sulfonylureas[J].J?Chromatogr?A，1992，606(2)：237-247；MENNE?H?J，JANOWITZ?K，BERGER?B?M.Comparison?of?capillary?electrophoresis?and?liquid?chromatography?for?determination?of?sulfonylurea?herbicides?in?soil[J].J?AOAC?Int，1999，82(6)：1534-1540)。免疫學檢測法，其原理是在成功制備芐嘧磺隆人工抗原的基礎上，利用間接酶聯免疫檢測法(ELISA)來檢測樣品中芐嘧磺隆的含量，該方法具有靈敏度高、操作簡潔快速，無需精密儀器和專業人員在場等優點，在農殘的分析檢測中發展快速，近來也有磺隆類農殘的ELISA分析的文獻和專利研究報道(KELLEY?M?M，ZAHNOW?E?W，PETERSEN?W?C，TOY?S?T.Chlorsulfuron?determination?in?soil?extracts?by?enzyme?immunoassay[J].J?Agric?Food?Chem，1985，33(5)：962-965；ZHAO?J，YI?G?X，HE?S?P，et?al.Development?of?monoclonal?antibody-based?enzyme?linked?immunosorbent?assay?for?the?herbicide?chlorimuron-ethyl[J].J?Agric?Food?Chem，2006，54(14)：4948-4953；SCHLAEPPI?D，RAMSTEINER?D.Immunological?detection?of?triasulfuron：European，WO/1988/009798A[P].1997-01-15)。

酶聯免疫方法的關鍵點是制備具有免疫原性的人工抗原，高效價抗原的制備是得到特異性抗體及保證免疫檢測靈敏性的重要前提，其中半抗原的制備又是抗原制備的關鍵。芐嘧磺隆因分子量小而不具有免疫原性(分子量小于1000)，不能在動物體內產生抗體，必須與大分子載體偶聯制備人工抗原，才能誘導特異性抗體的產生。為此，必須設法先將芐嘧磺隆分子與載體蛋白質共價偶聯芐嘧磺隆人工抗原。現有合成的芐嘧磺隆人工抗原保留了芐嘧磺隆的全部分子結構(苯環部分、雜環部分和脲橋部分)，如200910234686.X的發明專利中的記載，其免疫制備而得的抗體僅僅能識別一種芐嘧磺隆分子。