[發(fā)明專利]一種白色念珠菌PCR熒光檢測試劑盒及其檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110417477.6 | 申請日： | 2011-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN102417931A | 公開（公告）日： | 2012-04-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 何華東;黃發(fā)平 | 申請（專利權(quán)）人： | 泰普生物科學(xué)（中國）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/725 |
| 代理公司： | 福州市鼓樓區(qū)博深專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35214 | 代理人： | 林志崢 |
| 地址： | 350002 福建省福州市金*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 白色 念珠菌 pcr 熒光 檢測 試劑盒 及其 方法 | ||
1.一種白色念珠菌PCR熒光檢測試劑盒，包括PCR反應(yīng)液，其特征在于，所述PCR反應(yīng)液包括引物和熒光探針A，所述引物分為上游引物A和下游引物A；
所述上游引物A的核苷酸序列為：5’-TTTGGTGGTGGTAGACAT-3’；
所述下游引物A的核苷酸序列為：5’-ATCAGGGTCAGGCACTTT-3’；
所述熒光探針A的核苷酸序列為：
5’-FAM-TAGATGTATTGGGGAACAATTTGCTTATGTTCA-BHQ-3’。
2.按權(quán)利要求1所述的白色念珠菌PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，還包括DNA提取液，dNTPs、tap酶、UNG酶、陽性對照、陰性對照。
3.按權(quán)利要求2所述的白色念珠菌PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，所述dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP、dUTP。
4.按權(quán)利要求2所述的白色念珠菌PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，所述DNA提取液包括：聚乙二醇辛基苯基醚、乙基苯基聚乙二醇、正辛酸，所述聚乙二醇辛基苯基醚的質(zhì)量百分數(shù)為2％，所述乙基苯基聚乙二醇的質(zhì)量百分數(shù)為1％，所述正辛酸的濃度為0.04M。
5.按權(quán)利要求1所述的白色念珠菌PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，還包括提取固形物，所述提取固形物為直徑0.5mm和1.0mm兩種玻璃珠，按質(zhì)量配比9∶1比例配制出。
6.按權(quán)利要求1所述的白色念珠菌PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，引入了一個人工構(gòu)建的neo內(nèi)參照系統(tǒng)用于避免檢測結(jié)果假陰性，所述內(nèi)參照系統(tǒng)的引物、探針序列組合如下：
上游引物B：5’-GACTAAACTGGCTGACGG-3’；
下游引物B：5’-GTATTTCGTCTCGCTCAG-3’；
熒光探針B：5’-TEXrd-ATGCCTCTTCCGA-BHQ-3’。
7.按權(quán)利要求1所述的白色念珠菌PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光探針的5’端標記FAM熒光基團，3’端標記BHQ淬滅基團。
8.一種白色念珠菌PCR熒光檢測方法，其特征在于，其中PCR擴增的靶序列如SEQ?ID?NO.7，PCR擴增所用引物為：上游引物A序列如：SEQ?ID?NO.1，下游引物A序列如：SEQ?ID?NO.2，熒光探針A序列如：SEQ?ID?NO.3。
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