[發明專利]一種檢測埃博拉病毒、馬爾堡病毒、拉沙熱病毒和裂谷熱病毒的多重PCR試劑盒及其引物

無效

• 申請號: 201110416348.5
• 申請日: 2011-12-13
• 公開（公告）號: CN102719557A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 相大鵬;師永霞;鄭夔;黃吉城;幸蘆琴;李小波;洪燁;蘇錦坤;鐘玉清;郭波旋
• 申請（專利權）人: 廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉孟斌

技術領域

本發明涉及病原分子生物學檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測四種烈性傳染病病毒，包括埃博拉病毒、馬爾堡病毒、拉沙熱病毒和裂谷熱病毒的多重熒光PCR檢測試劑盒及其引物。?

背景技術

埃博拉出血熱(Ebola?hemorrhagic?fever，EHF)是由埃博拉病毒(Ebola?virus，EBV)引起的一種急性出血性傳染病。主要通過接觸病人或感染動物的體液、排泄物、分泌物等感染，臨床表現主要為發熱、出血和多臟器損害。埃博拉出血熱的病死率高，可達50％-90％。埃博拉病毒源于非洲的剛果，在生物安全等級上和天花病毒同為最危險的第四級，1976年首度在非洲扎伊爾北部和蘇丹南部出現。世界衛生組織已將埃博拉病毒列為對人類危害最嚴重的病毒之一。埃博拉病毒屬絲狀病毒科絲狀病毒屬，可分為四種不同亞型：扎伊爾埃博拉(EBO-Z)，蘇丹埃博拉(EBO-S)，科特迪瓦埃博拉(EBO-C)和萊斯頓埃博拉(EBO-R)。前3種亞型可使人和靈長類動物發病，其中扎伊爾埃博拉的致死率為88.8％；蘇丹埃博拉則為53.2％。而瑞斯頓埃博拉只會使靈長類動物發病，但人類也可能感染這種病毒亞型從而成為無癥狀的病毒攜帶者，在西太平洋就有這種病例出現。埃博拉出血熱有4個傳播途徑：直接接觸病人的血液、分泌物等體液傳播；通過直接接觸病人尸體傳播；處理發病或病死的猩猩、獼猴等動物引起傳播；醫務人員在護理病人時不采取有效的個人防護也會引起傳播。此病目前沒有有效藥物可以治療。?

馬爾堡出血熱(Marburg?hemorrhagic?fever，MHF)是由馬爾堡病毒(Marburg?Virus)引起的以急性發熱伴有嚴重出血為主要臨床表現的傳染性疾病，經密切接觸傳播，傳染性強，病死率高。由于馬爾堡病毒來自于非洲綠猴并主要在非洲流行，因此馬爾堡出血熱又被稱為青猴病和非洲出血熱。歷史上最大的馬爾堡出血熱暴發是于2004年10月始于安哥拉國威熱省。截止2005年7月最后一例實驗室確診病例，安哥拉衛生部報告全國累計病例總數為374例，其中有329例死亡(病死率為88％)。?

拉沙熱是一種名為拉沙病毒所引致的急性病毒感染，流行于西非洲的國家：幾內亞、利比里亞、塞拉利昂和尼日利亞。病毒的宿主是西非洲的野鼠。拉沙熱是經由氣霧或直接接觸染病的嚙齒類動物排泄物而受感染，也可以直接經由病人在發熱期傳播。人類感染病毒后可以沒有病徵，但亦可能病況嚴重，導至死亡。?

裂谷熱(Rift?Valley?fever，RVF)是由裂谷熱病毒(Rift?Valley?fever?Virus，RVFV)引起的、是一種病毒性人畜共患病，主要影響的是動物，但也能傳染人。傳染可導致人畜患染嚴重疾病，發病率和死亡率極高。該疾病因裂谷熱感染的牲畜死亡和流產，也會造成重大經濟損失。裂谷熱病毒是一種屬于布尼亞病毒科白蛉病毒屬、基因組為單股負鏈RNA的病毒，有包膜，直徑約為90～100nm。絕大多數人感染裂谷熱病毒是與受感染動物的血液或器官直接或間接接觸所造成的，受感染蚊子叮咬也會導致人間感染，通常是伊蚊叮咬，嗜血(食血)蒼蠅也有可能傳播裂谷熱病毒。境外一些來自疫區的感染者或媒介昆蟲通過國境口岸的帶入，均可引起裂谷熱病毒在我國的擴散。?

隨著與世界各國交通往來的日益頻繁，境外一些來自疫區的人員可通過國境口岸進入我國，存在著將上述四種疾病輸入我國的危險。現有技術或行業標準沒有涉及到對上述四種病毒進行分子生物學快速檢測鑒定。因此，有必要在國境口岸建立一套上述四種病毒的分子生物學快速檢驗鑒定方法。?

發明內容

為了克服上述技術缺陷，本發明提供了一種同時檢測四種國外烈性傳染病埃博拉病毒、馬爾堡病毒、拉沙熱病毒和裂谷熱病毒的多重熒光PCR檢測試劑盒及其引物。?

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：?

本發明提供的埃博拉病毒、馬爾堡病毒、拉沙熱病毒和裂谷熱病毒的多重熒光PCR檢測試劑盒，包括?主反應液(QuantiFast?Multiplex?Master?Mix)、RT反應液(QuantiFast?RT?Mix)等試劑外，還包括四種病毒的引物和探針，如SEQ?ID?NO：1-13所示的引物，以及序列如SEQID?NO：14-18所示的探針。?

引物的具體序列如下：?

Ef：CGGACACACAAAAAGAAAGAA?

Er1：ATCAGTGTCAATGAGAGGAAAAT?

Er2：ATTAGTTTGAGTTTGAGGAAAATG?

Mf：CATCTGATGGGATTCACACTGAG?