[發明專利]一種重組弓形蟲蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201110415726.8
• 申請日: 2011-12-13
• 公開（公告）號: CN102492696A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 陳廷友;王志新;王健;張曉剛;畢大偉
• 申請（專利權）人: 北京英諾特生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/30
• 分類號: C12N15/30;C07K14/45;C12N15/70;C12N1/21;C12Q1/68;C12R1/19
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 呂世靜

技術領域

本發明涉及基因工程、疫苗研制和診斷試劑等領域，具體地涉及一種重組弓形蟲蛋白及其應用。

背景技術

剛地弓形蟲(Toxoplasma?gondii?Nicolle?&?Manceaux，1908)是貓科動物的腸道球蟲，由法國學者Nicolle及Manceaux在剛地梳趾鼠(Ctenodactylus?gondii)單核細胞內發現，蟲體呈弓形，命名為剛地弓形蟲。該蟲呈世界性分布，人和許多動物都能感染，引起人畜共患的弓形蟲病，尤其在宿主免疫功能低下時，可造成嚴重后果，屬機會致病原蟲(opportunistic?protozoan)。

先天性弓形蟲病只發生于初孕婦女，經胎盤血流傳播。受染胎兒或嬰兒多數表現為隱性感染，有的出生后數月甚至數年才出現癥狀；也可造成孕婦流產、早產、畸胎或死產，尤以早孕期感染，畸胎發生率高。據研究表明，嬰兒出生時出現癥狀或發生畸形者病死率為12％，而存活中80％有精神發育障礙，50％有視力障礙[1]。以腦積水、大腦鈣化灶、視網膜脈絡膜炎和精神、運動的障礙為先天性弓形蟲病典型癥侯。

獲得性弓形蟲病可因蟲體侵襲部位和機體反應性而呈現不同的臨床表現。多數隱性感染者，當患有惡性腫瘤，施行器官移植，長期接受免疫抑制劑、放射治療、細胞毒劑等醫源性免疫受損情況下或先天性、后天性免疫缺陷者，如艾滋病患者、孕期婦女等都可使隱性感染狀態轉為急性重癥，使原有病癥惡化。建立TOX感染的快速、準確檢測方法是預防TOX感染的關鍵所在。

目前弓形蟲感染診斷方法主要有免疫學檢測、直接鏡檢、病原體分離和聚合酶鏈反應(PCR)檢測等。免疫學方法由于操作簡便快捷適于臨床使用。本發明提供了一種用基因工程方法生產的重組抗原，能夠避免由于蛋白質抗原純度低或特異性差造成假陽性而降低檢測特異性等問題，為弓形蟲感染的檢測提供更為特異、準確的原料。

在全球范圍內，目前缺乏有效治療弓形蟲感染藥物的情況下，通過接種疫苗預防弓形蟲感染成為一種重要的醫學干預手段。同時，弓形蟲疫苗的研制也是進行弓形蟲研究的重要領域之一。本發明提供的弓形蟲重組蛋白具有高特異性、強免疫原性和盡量完整的抗原決定簇，在弓形蟲疫苗研制領域具有實際應用價值。

發明內容

(一)要解決的技術問題

本發明的目的是提供一種重組弓形蟲蛋白，本發明的另一目的是提供該重組弓形蟲蛋白在制備檢測試劑盒中的應用。

(二)本發明的技術方案

本發明提供了一種如SEQ?ID?NO：1所示的編碼人弓形蟲蛋白的核酸。還提供了由該核酸編碼的人弓形蟲蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本發明還提供了一種包含SEQ?ID?NO：1所述核酸的表達載體pET-28a-TOX，它是將序列SEQ?ID?NO：1所述的重組DNA序列插入到質粒pET-28a上得到的重組質粒，其質粒圖譜如附圖2所示。

將表達載體pET-28a-TOX導入大腸桿菌中，得到表達人弓形蟲蛋白的工程菌株。

本發明還提供一種編碼人弓形蟲蛋白的制備方法，用SEQ?ID?NO：1的核酸構建表達載體，并在所述載體所適合的原核宿主細胞中表達權利要求1所述核酸編碼的人弓形蟲蛋白。

本發明還提供SEQ?ID?NO：1所述重組DNA的人弓形蟲感染檢測試劑盒，以及SEQ?ID?NO：1所述的重組DNA在制備人弓形蟲感染檢測試劑盒中的應用。

本發明利用SEQ?ID?NO：1所示核苷酸序列通過基因工程方法制備弓形蟲蛋白可以通過如下步驟實現：

1)獲得具有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列；

2)將該核苷酸序列導入質粒，優選pET-28a質粒；

3)將該質粒導入原核宿主細胞，優選大腸桿菌宿主細胞，更優選BL21(DE3)菌株中；

4)在有利于所述核苷酸序列表達的條件下培養所述宿主細胞；

5)回收、純化及復性所表達的重組蛋白。

本發明還涉及包含本發明弓形蟲蛋白的組合物以及試劑盒。所述的組合物可作為檢測弓形蟲感染的試劑或作為檢測弓形蟲感染的試劑盒。

本發明提供的弓形蟲蛋白抗原具有高特異性、強免疫原性和盡量完整的抗原決定簇，因此，本發明的弓形蟲蛋白可用于制備弓形蟲疫苗，如亞單位疫苗等，同樣，本發明所公開的如SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列也可用來制備DNA疫苗。

以下將更具體地描述本發明的內容。