[發(fā)明專利]畢赤酵母制備人白細(xì)胞介素32β的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110413360.0 | 申請日： | 2011-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN102392043A | 公開（公告）日： | 2012-03-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳偉;鄭海軍;來麗麗;郁心;鄔敏辰;吳靜 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N1/19;C12P21/02;C12R1/84 |
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| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 酵母 制備 白細(xì)胞 32 方法 | ||
1.一種人白細(xì)胞介素32β(hIL-32β)的重組真核表達(dá)載體，其特征在于，所述的重組真核表達(dá)載體中插入了hIL-32β的編碼基因。
2.如權(quán)利要求1所述的重組真核表達(dá)載體中的hIL-32β的編碼基因，其DNA的核苷酸序列對應(yīng)于序列表中的SEQ?IDNO：1。
3.如權(quán)利要求1所述的重組真核表達(dá)載體中的hIL-32β的編碼基因，其編碼產(chǎn)物的氨基酸序列對應(yīng)于序列表中的SEQ?ID?NO：2。
4.一種重組畢赤酵母工程菌，其特征在于，所述的重組畢赤酵母的染色體中整合有權(quán)利要求1所述的hIL-32β的編碼基因，并且分泌表達(dá)重組hIL-32β至培養(yǎng)液中。
5.一種制備重組hIL-32β的方法，其特征在于，包括步驟：
(1)用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液，培養(yǎng)權(quán)利要求4所述的重組畢赤酵母工程菌；
(2)在培養(yǎng)液中添加適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)劑，誘導(dǎo)重組畢赤酵母工程菌分泌表達(dá)重組hIL-32β；
(3)從培養(yǎng)液中分離純化出重組畢赤酵母分泌表達(dá)的重組hIL-32β。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(1)所用的培養(yǎng)液為BMGY培養(yǎng)液和BMMY培養(yǎng)液；步驟(2)所用的誘導(dǎo)劑為甲醇，添加甲醇的終濃度為培養(yǎng)液體積的0.5～1％；步驟(3)所用的分離純化重組hIL-32β的方法為先用弱陰離子型離子交換層析分離培養(yǎng)液中的重組hIL-32β，再用凝膠過濾層析得到純化的重組hIL-32β。
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