[發明專利]肺炎克雷伯菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

無效

• 申請號: 201110412000.9
• 申請日: 2011-12-09
• 公開（公告）號: CN103160574A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 李明;肖湘文;高秀潔;陳華云;程鋼;何蘊韶
• 申請（專利權）人: 中山大學達安基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種實時熒光RT-PCR法檢測肺炎克雷伯菌的試劑盒，該試劑盒包括：(1)DNA提取液；PCR檢測試劑：KP?PCR反應液A、KP?PCR反應液B；質控品：陰性質控品、KP陽性質控品，和(2)分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒，其中KP?PCR反應液A由對應的PCR反應Buffer、正向引物、反向引物、寡核苷酸探針、純水組成，其特征在于用于靶多核苷酸擴增的正向和反向引物的序列分別是5’-GCGCGCACCTATTGTGTTG-3’和5’-TCGCTGTGCTTGTCATCCTT-3’；

靶多核苷酸擴增和監測體系的寡核苷酸探針的序列是5’X-CCGTCTACACCCGGGCGCC-Y?3’，其中X/Y表示熒光標記檢測體系，包括能夠與靶多核苷酸結合并且兩末端分別結合有熒光發生基團和熒光淬滅基團的寡核苷酸探針。

2.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于陰性質控品為生理鹽水、正常人或其它病毒感染者的咽拭子，鼻咽分泌物或痰液樣本。

3.根據權利要求1的試劑盒，陽性質控品為重組質粒pGEM-T-KP或KP陽性的咽拭子，鼻咽分泌物或痰液樣本，其特征還在于陽性質控品包含下列序列或80％同源的核苷酸序列：

GCGCGCACCTATTGTGTTGGCCGTCTACACCCGGGCGCCTAACAAGGATGACAAGCACAGCGA。

4.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于RT-PCR反應酶系包含耐熱DNA聚合酶、UDG酶和dUTP。

5.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于反應體系中引物最終濃度為0.4umol/ml，探針最終濃度為0.2umol/ml。

6.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于反應體系中引物Mg²⁺最終濃度為3mM。

7.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于反應體系中最終引物退火溫度為55攝氏度。