[發明專利]具有腫瘤靶向、體內示蹤和治療作用的脂質體藥物組合物及制備方法

無效

• 申請號: 201110411335.9
• 申請日: 2011-12-09
• 公開（公告）號: CN102429868A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 李宗金;向榮;王麗娜
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K49/00;A61K47/42;A61K31/704;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.一種具有腫瘤靶向、體內示蹤和治療作用的脂質體藥物組合物，其特征在于此脂質體藥物組合物由磷脂雙份子層的脂質體核心和靶標分子抗CD44抗體組成，并能攜帶有示蹤作用和治療作用的報告基因，也能包裹阿霉素。

2.一種攜帶有示蹤作用和治療作用報告基因的靶向脂質體藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為：

(1)1，2-油酰基磷脂酰膽堿(DOPC)、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、膽固醇、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DOPE-PEG2000)和1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-馬來酰亞胺(DOPE-PEG2000-Mal)，按原始摩爾比為40∶40∶40∶6∶3的比例混合，溶于甲醇中；

(2)利用旋轉蒸發儀使步驟(1)的溶液蒸發，形成脂質體膜；

(3)步驟(2)形成的脂質體膜用磷酸鹽緩沖液(PBS)水化一小時，使得總脂質濃度為3.32毫摩爾每升；

(4)超聲使步驟(3)得到的溶液成為微小均一的脂質球，過100納米的多聚碳酸酯膜，成為粒徑在100納米的均一脂質體；

(5)按抗體與DOPE-PEG2000-Mal的摩爾比為1∶50將抗CD44抗體加入步驟(4)得到的脂質體中，利用巰基與脂質體上的PEG鏈結合，得到靶向脂質體；

(6)構建同時含有海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合基因的報告基因表達質粒；

(7)報告基因與脂質體的偶聯，將脂質體與步驟(6)構建的報告基因表達質粒按每100微升脂質體20微克質粒的比例混合，利用脂質體表面的正電荷與質粒攜帶的負電荷集合，形成靶向脂質體-DNA復合物，即為脂質體藥物組合物。

3.一種攜帶有阿霉素的靶向脂質體藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為：

(1)1，2-油酰基磷脂酰膽堿(DOPC)、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、膽固醇、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DOPE-PEG2000)和1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-馬來酰亞胺(DOPE-PEG2000-Mal)，按原始摩爾比為40∶40∶40∶6∶3的比例混合，溶于甲醇中；

(2)利用旋轉蒸發儀使步驟(1)的溶液蒸發，形成脂質體膜；

(3)步驟(2)中形成的脂質體膜用300毫摩爾每升的(NH4)₂HPO₄水化一小時，使得總脂質濃度為3.32毫摩爾每升；

(4)超聲使步驟(3)得到的溶液成為微小均一的脂質球，過100納米的多聚碳酸酯膜，使其成為粒徑在100納米的非靶向脂質體；

(5)按照每毫升脂質體1毫克濃度為10mg/ml的阿霉素的比例向步驟(4)得到的脂質體中加入阿霉素，混合均勻，55℃反應1小時，室溫放置過夜，利用脂質體內外的磷酸鹽梯度，使阿霉素進入脂質體；

(6)過層析柱PD-10純化，用水洗脫，去除沒有被包裹的阿霉素；

(7)按抗體與DOPE-PEG2000-Mal的摩爾比為1∶50的比例向步驟(6)純化后的脂質體中加入抗CD44抗體，利用巰基與脂質體上的PEG鏈結合，得到阿霉素靶向脂質體。