[發明專利]檢測22q11微缺失綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒

有效

• 申請號: 201110410181.1
• 申請日: 2011-12-09
• 公開（公告）號: CN102533974A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 秦勝營;李笑天;賀林;郭奇桑;吳茜;龔小會
• 申請（專利權）人: 上海交通大學;復旦大學附屬婦產科醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C40B40/06
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

技術領域

本發明涉及一種生物技術領域的基因芯片及使用方法、試劑盒，具體涉及一種檢測22q11微缺失綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。

背景技術

22q11微缺失綜合征(22q11DS)是最常見的遺傳綜合征之一，在新生兒中的發生率約為1/9804～1/5950，其發生是由于22號染色體長臂近著絲粒段q11.21～q11.23雜合性缺失所致。主要包括以臨床表型特征定義的DiGeorge綜合征(DGS)、腭-心-面綜合征(VCFS)、圓錐動脈干-異常面容綜合征(CAFS)、Cayler心面綜合征和部分單純性先天性心臟病(CHD)。盡管22q11DS表型廣泛且多樣，但大多數患有CHD，由于他們經常合并低鈣血癥、免疫功能低下、后鼻孔堵塞等異常，手術成功率及預后遠不如非綜合征型CHD患者，所以產前診斷、二級干預將成為預防嚴重出生缺陷的主要手段。

先天性心臟病CHD是22q11最常見的表型，大約75％～85％的22q11DS患者都會發生CHD，并且所涉及的CHD表型并不特異，換言之，幾乎所有CHD類型的患者都有可能存在22q11微缺失。

除CHD外，22q11DS患者還可能存在多個系統的異常，文獻報道的有180多種，比較常見的有典型的面容(瞼裂狹小、盔狀眼瞼、鼻根部凸出、鼻尖肥大、方形外耳郭、口及下巴較小)、細胞免疫缺陷、低鈣血癥、腭裂、胃腸道功能紊亂和喂養困難、生殖泌尿器官畸形、骨骼異常、內分泌紊亂、語言和學習障礙、行為和精神異常等。嬰兒常常由于顯著的喂養困難而導致生長發育停滯；較大的兒童則往往會因一系列行為問題如注意力不集中、多動癥、孤獨癥而在學校中經歷困難；成人則會出現反復性的呼吸道感染、自身免疫紊亂、心理異常、精神分裂癥。嬰兒期持續的低鈣血癥是由于甲狀旁腺功能低下所致，通常在1歲時恢復正常，但兒童期和成人期容易復發。

由于CHD是22q11DS常見的表型，涉及類型多種多樣，且隨著國際婦產科超聲協會“胎兒心臟篩查指南”的頒布，對妊娠中晚期胎兒心臟篩查進行指導，規范了篩查切面，提高了篩查效率，使得大部分復雜先心病在產前得以診斷。因而，對超聲篩查發現的CHD胎兒進行22q11微缺失產前診斷，及早進行出生缺陷干預及再發生育風險評估，將成為產前診斷的重要課題；此外，由于10％～15％的22q11微缺失來自遺傳，有22q11微缺失生育史和夫婦雙方中有22q11微缺失者再次妊娠時也需進行產前診斷。

目前對22q11DS的檢測有以下幾種方法：染色體核型分析，一般作為初篩手段；熒光原位雜交(FISH)，檢出率為90％-95％；多重PCR，但是必須有父母的DNA作為對照；以及多重連接探針擴增(MLPA)、實時熒光定量PCR(RT-PCR)等。然而尚無一種快速、低成本、大通量和自動化檢測22q11微缺失綜合征基因突變的方法。

比較基因組雜交(CGH)芯片分析技術是一種突破性技術，能夠支持研究人員通過微陣列準確研究與疾病有關的染色體的變化。比較基因組雜交(CGH)芯片分析的原理是在一張芯片上用兩份標記不同熒光素的樣品(檢測樣品和對照樣品)同時進行雜交，從而快速而又直觀地檢測實驗樣品和對照樣品之間基因組DNA的拷貝數量的差異。CGH應用于疾病遺傳學的研究，可以提供一個全基因組的掃描圖，提示樣本DNA在整個染色體組的哪個特定位置存在擴增或缺失，那些發生擴增的區域，極有可能存在致病基因，而缺失區域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一種新的技術方案來克服現有技術的上述不足和缺點。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種檢測22q11微缺失綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。本發明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩定性好，時間短，成本低的特點。本發明還提供了前述檢測22q11微缺失綜合征的基因芯片的使用方法和試劑盒。

本發明的目的是通過以下技術方案實現：

第一方面，本發明提供一種檢測22q11微缺失綜合征的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ?ID?N0.1～50所示的核苷酸序列。

優選地，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。

第二方面，本發明還涉及前述檢測22q11微缺失綜合征的基于芯片的使用方法，包括以下步驟：

(a)制備樣品DNA片段；

(b)熒光標記上述DNA片段；