[發(fā)明專利]檢測Angelman綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110410178.X
• 申請日: 2011-12-09
• 公開（公告）號: CN102559872A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設計）人: 賀林;李笑天;秦勝營;郭奇桑;吳茜;龔小會
• 申請（專利權）人: 上海交通大學;復旦大學附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海漢聲知識產(chǎn)權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

技術領域

本發(fā)明涉及一種生物技術領域的基因芯片及使用方法、試劑盒，具體涉及一種檢測Angelman綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。

背景技術

Angelman綜合征(Angelman?syndrome，AS)，又名快樂木偶綜合征，是一種基因組印記性疾病，最早由Hurry?Angelman在1965年報道。該病在臨床上表現(xiàn)為復雜的多系統(tǒng)異常，主要I臨床癥狀包括小頭畸形、快樂木偶樣的共濟失調(diào)步態(tài)、癲癇、EEG異常、過度興奮和發(fā)作性大笑等。母源15號染色體q11-13區(qū)域的異常是導致該病發(fā)生的主要原因，目前已明確有4種分子病理機制會導致AS的發(fā)生。國外報道AS的發(fā)病率約為2.5/100000-10/100000。目前的研究表明4種明確的機制會導致Angleman綜合征的發(fā)生：(1)母源染色體15q11.2-13關鍵區(qū)域發(fā)生4～6Mb的大片段缺失(占患兒的70％)，UBE3A基因位于這一區(qū)域痰，因此母源UBE3A基因表達缺失；(2)15號染色體父源單親二體性(uniparental?disomy，UPD，5％)，即患兒的兩條15號染色體都來自父源，缺乏母源15號染色體，因此缺乏母源的UBE3A基因，而父源UBE3A基因不具有表達活性；(3)印記缺損(imprinting?defect，ID，5％)，母源15q11.2-13區(qū)域呈現(xiàn)異常的印記狀態(tài)，從而引起UBE3A基因表達出現(xiàn)異常；(4)母源UBE3A基因發(fā)生突變(10％)，無法正常表達。這4種機制都會間接或直接引起UBE3A基因的低表達或不表達，從而使患者產(chǎn)生AS特征性的臨床表現(xiàn)。另有約10％的AS患者其致病機制尚未明確。

基于AS的發(fā)病機制不同，已建立了多種實驗室診斷方法，其中MS-PCR是最主要和最常用的診斷方法。由于在AS的分子機制中，15q11-13缺失、父源單親二倍體和印記缺陷均表現(xiàn)為甲基化狀態(tài)的異常，涉及這3種機制的病例均可應用MS-PCR進行診斷，并且這3種機制的病例共占AS的80％，因此可首先應用MS-PCR方法對病例進行初步診斷。此外，還可以使用FISH的方法，檢出率為70％。然而尚無一種快速、低成本、大通量和自動化檢測Angelman綜合征基因突變的方法。

比較基因組雜交(CGH)芯片分析技術是一種突破性技術，能夠支持研究人員通過微陣列準確研究與疾病有關的染色體的變化。比較基因組雜交(CGH)芯片分析的原理是在一張芯片上用兩份標記不同熒光素的樣品(檢測樣品和對照樣品)同時進行雜交，從而快速而又直觀地檢測實驗樣品和對照樣品之間基因組DNA的拷貝數(shù)量的差異。CGH應用于疾病遺傳學的研究，可以提供一個全基因組的掃描圖，提示樣本DNA在整個染色體組的哪個特定位置存在擴增或缺失，那些發(fā)生擴增的區(qū)域，極有可能存在致病基因，而缺失區(qū)域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一種新的技術方案來克服現(xiàn)有技術的上述缺陷和不足。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種檢測Angelman綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩(wěn)定性好，時間短，成本低。本發(fā)明還提供了一種檢測Angelman綜合征的基因芯片的使用方法及試劑盒。

本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)：

第一方面，本發(fā)明提供一種檢測Angelman綜合征的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ?ID?NO.1～50所示的核苷酸序列。

優(yōu)選地，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚苯乙烯。

第二方面，本發(fā)明還涉及前述檢測檢測Angelman綜合征的基因芯片的使用方法，包括以下步驟：

(a)制備樣品DNA片段；

(b)熒光標記上述DNA片段；

(c)洗脫上述標記產(chǎn)物；

(d)將標記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；

(e)掃描檢測基因芯片的雜交信號，獲得結果。

第三方面，本發(fā)明還涉及一種用于檢測Angelman綜合征的試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1所述的基因芯片。

優(yōu)選地，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3-dUTP。

優(yōu)選地，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5-dUTP。