[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)牙鲆感染β諾達(dá)病毒的特異性引物及其檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110407736.7
• 申請(qǐng)日: 2011-12-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102367495A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫金生;張亦陳;劉逸塵;耿緒云;顧中華;杜宏薇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種用于檢測(cè)牙鲆感染β諾達(dá)病毒的特異性引物，其特征在于：包括2條N2L2fw和N2L2rw外側(cè)引物序列：CGTCCGCTGTCCATTGAC和GGGGCTGCTCATCAGAGT；2條N2L2fn和N2L2rn內(nèi)側(cè)引物序列：GCAGGTGTGCCAGCATTTCCTTTTTACAGCCTTGGAACTGGAGA和CTGGTTTCGCTGGGGCATCTTTTTGTAGGCAACGCCATCTGTG。

2.一種采用權(quán)利要求1所述的特異性引物快速檢測(cè)牙鲆感染β諾達(dá)病毒的方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行：

（1）采用權(quán)利要求1所述的2條外側(cè)引物和2條內(nèi)側(cè)引物序列，利用逆轉(zhuǎn)錄酶和鏈置換型BstDNA聚合酶，對(duì)供試的樣品進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和鏈置換式擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)進(jìn)行90分鐘；反應(yīng)的總體積為25μL，其各種成分分別為：預(yù)混引物5μL，dNTP?4μL，1×Thermopol?Roaction?Buffer?2.5μL，M-Mlv反轉(zhuǎn)錄酶?1μL，Bst?DNA聚合酶?1μL，模板5μL，DEPC水?6.5?μL；混勻后42℃，10min；65℃，45min；80℃，10min；4℃保存；其中引物濃度均為10μM的預(yù)混引物體積比為：N2L2fn：N2L2fw：N2L2rn：N2L2rw=4：1：4：1；

（2）利用熒光染料SYBR?GREEN?I呈現(xiàn)反應(yīng)結(jié)果，在可見(jiàn)光下肉眼即可辨識(shí)，或利用紫外觀察箱輔助觀察；其中所述的模板樣品可以是病灶組織的粗提液，或是由其抽提的RNA，還可以是由抽提的RNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA等三種類型樣本。