[發明專利]含有編碼山梨酮脫氫酶基因載體的氧化葡糖桿菌的用途

無效

• 申請號: 201110407078.1
• 申請日: 2011-12-09
• 公開（公告）號: CN102492762A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 元英進;杜瑾
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P7/60;C12N15/53;C12N15/63;C12N1/21;C12R1/01;C12R1/11
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

1.含有編碼山梨酮脫氫酶基因載體的氧化葡糖桿菌的用途，其特征是將含有編碼山梨酮脫氫酶基因載體的氧化葡糖桿菌和巨大芽孢桿菌接種到發酵培養基中，培養，獲得2-酮基-L-古龍酸。

2.根據權利要求1所述的用途，其特征是所述含有編碼山梨酮脫氫酶基因載體的氧化葡糖桿菌的構建為：

(1)山梨酮脫氫酶基因的體外擴增：

采用細菌基因組提取試劑盒提取氧化葡糖桿菌基因組為模板；以SEQ?ID?No.1所示序列為上游引物，以SEQ?ID?No.2所示序列為下游引物，進行PCR擴增，回收如SEQ?ID?No.3所示的PCR擴增產物；

(2)編碼山梨酮脫氫酶基因載體的構建：

取步驟(1)獲得的PCR擴增產物用HindIII酶和BamHI酶雙酶切；取載體pBBR1用KpnI酶和HindIII酶雙酶切；連接，轉化入大腸桿菌DH5α中，獲得編碼山梨酮脫氫酶基因載體；(3)氧化葡糖桿菌的轉化：

取步驟(2)所得編碼山梨酮脫氫酶基因載體在1800V條件下電擊轉化入氧化葡糖桿菌，獲得含有編碼山梨酮脫氫酶基因載體的氧化葡糖桿菌。

3.根據權利要求1所述的用途，其特征是將含有編碼山梨酮脫氫酶基因載體的氧化葡糖桿菌和巨大芽孢桿菌接種到發酵培養基中，使含有編碼山梨酮脫氫酶基因載體的氧化葡糖桿菌的密度為4×10⁸cfu/ml，使巨大芽孢桿菌的密度為4×10⁸cfu/ml，培養條件為在30℃，250rpm條件下培養120h，獲得2-酮基-L-古龍酸；

所述發酵培養基為：按比例稱取L-山梨糖80g，玉米漿20g，尿素12g，KH₂PO₄1g，MgSO₄0.5g，CaCO₃1g，加水至1L，調pH為7.0，121℃滅菌20min。