[發明專利]一種人白血病細胞胞質體的制備及鑒定方法

有效

• 申請號: 201110404582.6
• 申請日: 2011-12-08
• 公開（公告）號: CN102492655A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 陳代雄
• 申請（專利權）人: 遵義醫學院附屬醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;G01N21/64
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 吳無懼

1.一種人白血病細胞胞質體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

第一，取對數生長期人白血病HL-60細胞，離心后去上清，沉淀用培養基懸浮，取Percoll溶液于離心管中，將上述細胞懸液鋪于Percoll溶液面，離心去除白膜層，沉淀用無血清DMEM懸浮，得到純化的HL-60細胞懸液；

第二，將上述純化的HL-60細胞懸液加入細胞松馳素和秋水酰堿，孵育，離心去除上清，留細胞沉淀；

第三，將上述的細胞沉淀再懸浮于含細胞松馳素的Percoll溶液中，加入超速離心管中配平，轉子提前預熱，水平離心吸棄上清，收集Percoll液面上的部分，加入預冷的DMEM混勻，離心去除上清，沉淀用DMEM懸浮，再離心去除上清，沉淀用DMEM懸浮，得到胞質體懸液；

第四，將上述的胞質體懸液鋪于Percoll液面上，水平離心吸取白膜層，加入DMEM混合，離心除去上清，用DMEM懸浮，得到人白血病細胞胞質體。

2.根據權利要求1所述的一種人白血病細胞胞質體的制備方法得到人白血病細胞胞質體的鑒定方法，其特征在于：采用熒光雙染色鑒定人白血病細胞胞質體：向人白血病細胞胞質體懸液中加4,6-聯脒-2-苯基吲哚二鹽酸鹽儲存液,再加入羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯儲存液，混勻，避光孵育，離心去上清；再加入PBS懸浮，離心去上清，此步驟再重復二次，PBS懸浮沉淀，將液體移入24孔板，沉降，用熒光顯微鏡觀察結果。