[發明專利]一種使用菊粉為原料發酵生產微生物油脂的方法

無效

• 申請號: 201110403350.9
• 申請日: 2011-12-07
• 公開（公告）號: CN102417915A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發明（設計）人: 汪倫記;糾敏;賈閃閃;邱智軍;張紅梅
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 李宗虎

1.一種使用菊粉為原料發酵生產微生物油脂的方法，其特征在于，包含以下步驟：

1）菊粉原料的水解

按重量比，取7份純度為90%的菊粉溶解到93份的蒸餾水中，加入過濾除菌的菊粉酶，加酶量為每克菊粉加入60～100U菊粉酶，在60℃條件下恒溫水解8～12?h，獲得菊粉水解液，備用；

?2）油脂微生物的發酵培養

①種子液的培養：在無菌條件下從活化后的新鮮的皮狀絲孢酵母菌斜面上挑取兩環菌種接種到已滅菌的豆芽汁種子液培養基中，在30℃恒溫、搖瓶轉速150r/min的條件下，搖瓶培養時間72h，得到發酵種子液，備用；

所述的豆芽汁培養基，其制作方法為：稱新鮮豆芽100g，放入燒杯中，加水1000mL，煮沸30min，用紗布過濾除去豆芽，用蒸餾水將剩余液體補充至1000mL，再加入蔗糖50g，加熱溶化即可制得，所述的豆芽汁培養基在使用前在121℃條件下滅菌20min；

②發酵培養：在步驟1）制得的菊粉水解液中，按每升菊粉水解液加入酵母膏5g、蛋白胨2g、磷酸二氫鉀1.0g和MgSO₄·7H₂O?0.5g的比例將上述添加物作為氮源和無機鹽加入到菊粉水解液中，攪拌溶解，再用濃度為0.2mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH值為5.5，制得菊粉水解液發酵培養基，菊粉水解液發酵培養基在115℃條件下滅菌30min，備用；

在滅菌后的菊粉水解液發酵培養基中接入步驟①中得到的發酵種子液，接入的發酵種子液的體積為菊粉水解液加入上述氮源及無機鹽后總體積的10%，在恒溫搖床培養箱中進行培養，培養溫度為30℃，搖床轉速為180r/min，發酵72h，發酵結束后在4500r/min?的轉速下離心10min獲得微生物油脂菌體，備用；

3）微生物油脂的提取

將步驟②中得到的油脂微生物菌體干燥，再用有機溶劑氯仿-甲醇法，對干燥的油脂微生物菌體細胞內的油脂進行提取，具體操作為：按每克菌體加入濃度為4mol/L鹽酸10mL的比例加入鹽酸，振蕩混勻，25℃恒溫條件下放置30～60min，然后在100℃的沸水浴中加熱3min，立即置于-20℃環境中冷凍30min；取出后，在其中加入2倍體積的氯仿-甲醇提取液，充分振蕩2min，再按照每克菌體加入1mL氯仿的比例加入氯仿，振蕩混勻，再按照每克菌體加入1.5mL蒸餾水的比例加入蒸餾水，振蕩混勻后在4000r/min的離心速度下離心15～25min，分離出的氯仿層中加入等體積的質量濃度為0.1%的NaCl溶液，在4000～5000r/min的離心速度下離心15～25min，收集氯仿層，于25℃靜止36h，揮發法除去氯仿，得到微生物油脂；

所述的氯仿-甲醇提取液中氯仿和甲醇的體積比為1:2。