[發明專利]定量檢測玉米赤霉烯酮的方法

無效

• 申請號: 201110402715.6
• 申請日: 2011-12-07
• 公開（公告）號: CN102520177A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 嚴亞賢;王元凱;孫建和
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，將ZEN半抗原分別與BSA和OVA偶聯，得到偶聯物ZEN-BSA和ZEN-OVA；

步驟二，用ZEN-OVA作為免疫原，采用常規方法制備抗ZEN的單克隆抗體；

步驟三，制備膠體金，用該膠體金標記抗ZEN的單克隆抗體，將標記后的單克隆抗體噴涂到金標墊上；

步驟四，在硝酸纖維素膜上進行ZEN-BSA、兔抗鼠抗體的噴涂，之后將所述噴涂后的硝酸纖維素膜放入牛血清白蛋白溶液中封閉；

步驟五，將所述金標墊、所述噴涂后的硝酸纖維素膜、樣品墊和吸水墊組裝成試紙條，干燥；

步驟六，根據已知不同濃度ZEN標準品的顯色值，繪制ZEN濃度與顯色值的標準曲線；

步驟七，取待測樣品用甲醇提取，離心，取上清，并用稀釋液稀釋，根據該待測樣品的甲醇提取液的顯色值，通過標準曲線得到該待測樣品提取液中的ZEN濃度。

2.如權利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步驟三中，所述膠體金的顆粒直徑為25nm。

3.如權利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步驟三中，所述膠體金的制備包括如下步驟：將100ml的0.01％HAuCl₄溶液加熱至沸騰，之后加入1ml的1％檸檬酸三鈉溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100ml，制備得到25nm的膠體金溶液，所述百分數為質量體積百分數。

4.如權利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步驟三中，所述抗玉米赤霉烯酮的單克隆抗體在被標記之前經過透析除鹽處理。

5.如權利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步驟三中，所述標記包括如下步驟：在攪拌的條件下，向膠體金溶液中加入抗玉米赤霉烯酮的單克隆抗體，使其終濃度達到3.6μg/mL，室溫下孵育15min，用0.1mol/L?K₂CO₃調節膠體金溶液的pH為6.5，然后加入10％BSA至BSA的終濃度為0.1％，10000rpm離心20min，棄上清，再用含1％BSA的2mM?pH為8.0的硼酸鹽緩沖液洗滌，共洗滌3次，最后加入含4％蔗糖、6％海藻糖、BSA和疊氮鈉分別為1％和0.05％的2mM?pH為7.4的硼酸鹽緩沖液中，即完成標記，所述百分數為質量體積百分數。

6.如權利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步驟五中，所述干燥為37℃烘箱干燥。

7.如權利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步驟七中，所述甲醇為80％的甲醇，所述百分數為體積百分數。

8.如權利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步驟七中，所述離心為2500g離心15分鐘。

9.如權利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步驟七中，所述稀釋液為含10％甲醇的0.05M?pH為7.4的PBST，所述百分數為體積百分數。