[發明專利]一株產胞外多糖的植物乳桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201110401207.6
• 申請日: 2011-12-06
• 公開（公告）號: CN102453689A
• 公開（公告）日: 2012-05-16
• 發明（設計）人: 艾連中;郭本恒;孫克杰;陳衛;張灝;邵麗;吳正鈞;陳萬義;杭鋒
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/04;C08B37/00;A61K31/715;A61P37/04;A23L1/30;A23C9/123;C12R1/25
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，特別涉及一株產胞外多糖的植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)及其在食品中的應用。

背景技術

乳酸菌(Lactic?acid?bacteria，LAB)是一類能利用可發酵性糖產生大量乳酸的細菌總稱，目前在自然界已發現的這類細菌在分類學上至少有23個屬。在食品、醫藥等領域應用較多的乳酸菌主要有乳桿菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬、乳球菌屬、片球菌屬和明串珠菌屬等。乳酸菌是益生菌最主要的來源，許多乳酸菌是人體腸道固有的益生菌，已具有改善人體腸道菌群，調節機體免疫力，抑腫瘤，降低血清膽固醇，調節血壓等重要的生理活性。

人類對乳酸菌在發酵乳制品和微生態制劑中的應用已取得了顯著的進展。目前研究的熱點是如何通過新型微生物發酵劑的開發而賦予發酵乳特定的功能性質。已知的乳酸菌發揮主要功能特性的作用機理，除了定殖、通過主要代謝產物(乳酸等)改善腸道內環境等以外，一些次生代謝產物如細菌素、胞外多糖等也發揮著非常重要的作用。其中具有理論和實際應用價值的乳酸菌胞外多糖(LAB?EPS)引起了國內外許多學者的研究興趣。

多糖是指由二十個以上單糖組成的糖類化合物。根據來源不同，多糖可以分為植物多糖、動物多糖和微生物多糖。乳酸菌胞外多糖是乳酸菌產生并分泌到細胞外的一種多糖。乳酸菌胞外多糖具有重要的工藝學功能，對酸乳、干酪及絕大多數發酵乳制品的流變性質、質構、口感以及風味具有重要的影響。乳酸菌胞外多糖可以改善乳制品的流變學特性和質構特性。由于天然增稠作用由產粘乳桿菌與非產粘球菌混合發酵形成的酸乳與非產粘菌株形成的酸乳相比口感滑潤、粘度增加；產胞外多糖乳酸菌能夠賦予酸乳更強的持水力，從而避免乳清析出；此外，產胞外多糖而產生的持水性增強有助于提高干酪等產品的得率。乳酸菌胞外多糖還具有良好的生理功能，如增強黏膜吸附作用、抗腫瘤、抗潰瘍、免疫調節、降膽固醇、降血壓等。因此，開展產胞外多糖乳酸菌的研究，對于改善乳制品生產加工、開發具有特定功能性質的乳酸菌發酵乳制品，具有十分重要的研究意義和經濟價值。開發具有益生功能的LAB?EPS成為目前研究的熱點。

20世紀60年代以來，多糖被認為是一種廣譜的非特異性的促進劑，在人類免疫中，可增強宿主細胞的細胞免疫和體液免疫功能，如激活巨噬細胞、T細胞、B細胞和NK細胞等，激活補體及誘導產生干擾素等，其作用將是激活人體的非特異性防御機能，在抗病毒、抗腫瘤、抗輻射等方面有很好的療效。(周世文，徐傳福.多糖的免疫藥理作用.中國生化藥物雜志，1994，15(2)：143-147)。

發明內容

本發明要解決的技術問題就是針對現有技術中缺乏高產胞外多糖的乳酸菌的不足，提供一株較高產胞外多糖的植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)。

本發明的技術方案如下：

本發明技術方案一：一株產胞外多糖的植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)，其保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC?No.5222。

本發明的技術方案二：一種植物乳桿菌CGMCC?No.5222的工作發酵劑，由包括以下步驟(a)或(b)的方法制備而得：

(a)將植物乳桿菌CGMCC?No.5222菌種接種于添加乳清蛋白的滅菌乳中培養至凝乳，連續培養活化兩代作為母發酵劑；將母發酵劑按3-5％(v/v)接種于添加乳清蛋白的滅菌乳中培養至凝乳，即得工作發酵劑；

(b)將植物乳桿菌CGMCC?No.5222菌種接種于液體培養基中連續活化兩代，然后將活化培養物按2-4％(v/v)接種于液體培養基中培養16-18h，固液分離得到細胞沉淀，將沉淀用無菌乳懸浮，即得工作發酵劑。

步驟(a)中，滅菌乳中添加乳清蛋白的量優選0.5-5％(wt)，更優選1％(wt)。培養至凝乳的方法是常規方法，較佳的在37℃條件下培養14-16h。

步驟(b)中，在液體培養基中活化的方法是植物乳桿菌的常規活化方法，較佳的在37℃條件下培養12-16h。所用的液體培養基是常規的植物乳桿菌液體培養基，較佳的如MRS液體培養基。固液分離的方法是常規的菌體發酵液的固液分離方法，包括離心法、過濾法等，本發明優選離心法，更優選在4℃條件下4000r/min離心15min。

本發明所述的植物乳桿菌CGMCC?No.5222的工作發酵劑中，活菌數優選10⁹cfu/mL以上。