[發(fā)明專利]一種定量檢測(cè)白介素8的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110399761.5
• 申請(qǐng)日: 2011-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN102520176A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李守瑋;任慶遠(yuǎn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 李守瑋;任慶遠(yuǎn)
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種定量檢測(cè)白介素8的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含白介素8磁分離試劑，酶標(biāo)抗體，增強(qiáng)劑，校準(zhǔn)品、控制品，濃縮液以及底物；所述試劑盒按照如下方法制備而成：

第一步：白介素8磁分離試劑的制備步驟：

1)將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg白介素8單克隆抗體溶于PH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1ml；

2)用移液槍吸取步驟1中的辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min；

3)將步驟2獲得的溶液加入到濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下濃縮30min至體積為0.5ml；

4)取0.5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；

5)加入步驟3獲得的抗體溶液，混勻后室溫反應(yīng)4小時(shí)；

6)加入0.3ml?1mol/L的TRIS溶液37℃15分鐘；

7)加入1.5ml?PH?7.20.1mol/L?PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒，上架，去上清；

8)用100ml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方為0.1％BSA，0.05％吐溫-20，0.02％NaN3，20％乙醇，4℃保存；

9)將步驟8獲得的溶液用磁珠緩沖液按照1∶1的體積比例混勻，即得磁分離試劑；所述磁珠緩沖液為濃度是1mol/L的TRIS-HCl緩沖液。

第二步：酶標(biāo)抗體制備步驟：

1)2.5mg白介素8單克隆抗體溶于1.0ml的N，N-二甲基甲酰胺中，加入1ml的10mg/ml辣根過氧化物酶水溶液和1.3mg碳化二亞胺，1小時(shí)后將1.0ml?20mg/ml的碳化二亞胺加入，混合物不斷攪拌，4℃過夜；

2)將步驟1的溶液裝入透析袋中，對(duì)0.15M的PH7.4PBS透析，4℃過夜，收集保留液；然后加入10ml濃度為15mg/ml的BSA溶液，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫蛔詈髮⑸鲜鋈芤河妹笜?biāo)抗體稀釋液以1∶1000的體積比混合均勻，即得酶標(biāo)抗體；所述酶標(biāo)抗體稀釋液為濃度是1mol/L的TRIS-HCl緩沖液。

第三步：增強(qiáng)劑配制步驟：

1)稱取TRIS1.56g和NaCl?4.23g于1L容器中；用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；

2)用量筒量取800ml純化水于上述1L容器中，充分?jǐn)嚢瑁敝镣耆芙猓{(diào)PH在7.35-7.45之間；

3)稱取Mak330.9g于上述1L容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0.2um濾器過濾。

第四步：

校準(zhǔn)品和控制品的配制：

將白介素8配制濃度分別為0.10、0.20、0.40、0.80、1.60ng/ml的校準(zhǔn)品；將白介素8配制成濃度分別為0.20、0.80ng/ml的控制品。

第五步：

濃縮液配制步驟，配制1L：

1)稱取TRIS?12.54g和NaCl?325.6g于1L容器中；

2)稱取5g?Tween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述1L容器中；

3)用移液器將Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；

4)用量筒量取800ml純化水于上述1L容器中，充分?jǐn)嚢瑁敝镣耆芙猓?/p>

5)調(diào)PH，控制其范圍在7.35-7.45之間；

6)最后定容1000ml，完全溶解后用0.2um濾器過濾即得。

第六步：

底物配制步驟，配制1L：

1)稱取TRIS?2.35g、NaCl?6.41g、Na₂SO₃?0.002g和Proclin-3000.2ml于1L燒杯中；

2)用量筒量取600ml純化水于1L燒杯中，充分?jǐn)嚢瑁敝镣耆芙猓{(diào)PH在7.95-8.05之間；

3)加入250ml?Lumi-Phos?530后，用0.2um濾器過濾收集濾液，用純化水定容至1000ml，混勻后即得。