[發明專利]一種96條件蛋白質結晶篩選試劑盒配方

無效

• 申請號: 201110399754.5
• 申請日: 2011-12-05
• 公開（公告）號: CN102517379A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 尹大川;解思曉;鹿芹芹;劉悅;沈何放;商澎
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/37;C12Q1/40;C12Q1/42;G01N33/68
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 顧潮琪

技術領域

本發明涉及一種用于蛋白質結晶篩選的96條件試劑盒。

背景技術

目前，對于蛋白質結晶條件的篩選首要選擇的篩選試劑盒為Hampton?Research公司的Index^TM96條件篩選試劑盒，具體成分見表1。

表1：Index^TM條件成分表

使用Index^TM對18種蛋白質進行結晶條件篩選研究，分別為纖維素酶、糜蛋白酶、肌紅蛋白、核糖核酸酶III、核糖核酸酶X?II、甜味蛋白、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、乳白蛋白、溶菌酶、糜蛋白酶原、刀豆球蛋白、淀粉酶、胃蛋白酶、細胞色素C、葡萄糖磷酸酶、血紅蛋白、枯草桿菌蛋白酶，統計得出其長出晶體的成功率僅為27.78％(5/18)，結果發現Index^TM對于大部分蛋白質(13/18)的篩選結晶條件無效，因此發明一種新的高效的篩選試劑盒十分必要。

發明內容

為了克服現有的96條件篩選試劑盒在蛋白質結晶條件篩選中成功率低的缺陷，本發明提供一種新的沉淀劑使用更加全面的96條件蛋白質結晶篩選試劑盒，可以有效提高蛋白質結晶條件篩選成功率。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案為：一種高效率的蛋白質結晶條件篩選的96條件試劑盒，命名為CU-Index，其具體組成如表2。包括四部分：緩沖液、鹽、沉淀劑和添加劑。

表2：CU-Index?96條件成分表

本發明的有益效果是：①本試劑盒所選沉淀劑的種類覆蓋齊全。其類型覆蓋全部自然界化合物——無機物和有機物，并且包括結晶常用的各種試劑，從而提高了結晶的成功率，增加了結晶的可能性；②本試劑盒所選用的鹽類物質中陰離子覆蓋全面。無機陰離子與有機陰離子同時存在，從低化合價離子(-1)到高化合價離子(-3)均有所涉及；③本試劑盒所選用的有機物化合價覆蓋廣泛。從低分子量有機物(乙醇)到高分子量有機物(聚乙二醇8000)均有涉及；④本試劑盒所用的pH范圍從3.5到9.5，覆蓋了大部分蛋白質可結晶的pH區間；⑤本試劑盒所選沉淀劑的濃度相對較高，因此實驗中所需蛋白質樣品的濃度就會大幅降低從而節省實驗成本，具有較高的商業推廣價值。

具體實施方式

配制CU-Index篩選條件：以配制100mL的條件A2(0.1M檸檬酸鈉，pH?4.0，0.2M疊氮化鈉，10％v/v?PEG?8000和10％v/v?PEG?4000)為例。第一步：配制濃度為1M，pH4.5的檸檬酸鈉緩沖液儲液；第二步：配制濃度為50％w/v的PEG?8000和PEG?4000以及濃度為2M的疊氮化鈉儲液；第三步：用移液管吸取檸檬酸緩沖液儲液10mL、疊氮化鈉儲液10mL、PEG?8000和PEG?4000儲液各20mL到燒杯中混勻，定容至100mL后再用0.22μm的濾膜過濾到干凈的試管中，A2條件配制完畢。同樣的方法配制其他條件。

下面用幾種蛋白質的結晶實驗來驗證該試劑盒的效果，以Hampton?Research公司的Index^TM篩選試劑盒作為對照。

實施例1：

用配制的CU-Index?96條件對纖維素酶(cellulase)進行條件篩選。具體配方見表3。

表3：實施例1中使用的CU-Index?96條件成分表

第一步：將美國Sigma公司的貨號為C0615的纖維素酶，溶于pH為7.0，濃度為0.025mol/L的N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸鈉緩沖液中，配制成濃度為10mg/mL的纖維素酶溶液，用0.22μm的濾膜濾去雜質。

第二步：本實施例使用配制的CU-Index?96條件對纖維素酶進行結晶條件篩選。