[發明專利]降解紙類垃圾產高木聚糖酶和低纖維素酶細菌的制備方法

無效

• 申請號: 201110398452.6
• 申請日: 2011-12-05
• 公開（公告）號: CN102492647A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 萬文菊;王紀亭;于愛蓮;張忠;高紅莉;楊春貴
• 申請（專利權）人: 泰山醫學院
• 主分類號: C12N1/22
• 分類號: C12N1/22;C12N1/20;C12N1/02
• 代理公司: 泰安市泰昌專利事務所 37207
• 代理人: 姚德昌

技術領域

本專利屬于生物技術，涉及一種降解紙類垃圾產高木聚糖酶和低纖維素酶細菌的制備方法。

背景技術

酶法制漿研究是傳統化學制漿工藝的主要研究方向之一，木聚糖酶在制漿造紙工業中的應用已日益受到人們的重視。國外在這方面已進行了大量研究，例如，用木聚糖酶預處理紙漿可改變紙張特性，木聚糖酶產生菌如果產生大量的纖維素酶，這對于提高紙漿纖維得率是不利的，所以產高木聚糖酶和低纖維素酶的細菌具有很高的應用價值。

發明內容

本發明提供一種從土壤中分離得到降解紙類垃圾產高木聚糖酶和低纖維素酶細菌的制備方法。

為實現以上目的，本發明提出以下技術方案：

采用選擇性培養基篩選并純化能夠降解濾紙的細菌。進行降解濾紙和毛巾紙試驗，肉眼觀察到上述紙質大量降解并進行紙質降解液纖維素酶和木聚糖酶等的檢測。其步驟如下

??（1）野外取攙雜有大量腐爛至棕黃色或黑色木屑的土壤，置干凈塑料袋中，在自然條件下風干7天。

??（2）利用鋪有濾紙的ST21CX培養基篩選降解濾紙的細菌：配制放線菌酮液。在100mL經高壓滅菌的ST21CX基礎液中加放線菌酮液1mL，倒在平板上。取無菌濾紙鋪于培養基上。將風干的土樣無菌研磨至研缽內，研磨成細粉狀，取適量使之均勻薄薄覆蓋在鋪有濾紙的ST21CX培養基上，28℃-30℃培養2～3周。

放線菌酮液：稱取放線菌酮1.25g，用乙醇溶解后用水定容于100mL容量瓶中，加入95%乙醇50mL,振搖使溶解,加入蒸餾水至200mL，過濾除菌。

ST21CX基礎液：g/l:?KNO3??1.0;??K2HPO4.2H2O?1.0;??MgSO4.7H2O?1.0;??CaCl2.2H2O?1.0;?FeCl3.6H2O??0.2;??瓊脂粉?15；??pH?7.2-7.4。?

?（3）挑取能夠明顯降解濾紙的菌落分別在VY/2培養基上28℃-30℃培養,然后再次挑取單菌落進行純化后,?VY/2培養基上擴大培養。既得多種初步降解紙類垃圾細菌。

VY/2培養基:?CaCl2·2H2O?0.1%?活性酵母粉0.5%??VB12?50μg/100ml?瓊脂1.5%??pH?7.2。VB12滅菌后加入。

篩選方法：

（4）將所得細菌分別接種在5?ml?Dubos?鹽培養液內，在Dubos?鹽培養液內中添加0．0５g濾紙，?28℃-30℃搖床培養一周。濾紙為鹽培養液的唯一碳原。篩選一周內能完全降解濾紙的細菌,?既得降解紙類垃圾產高木聚糖酶和低纖維素酶目標菌。

????Dubos?鹽培養液?：g/l:?K2HPO4.2H2O?1.0;?KCl?0.5;?MgSO4.7H2O?0.5;?NaNO3??0.5;?FeSO4.7H2O?0.01;?pH?7.2-7.4，兩滴10mM葡萄糖。

（5）接種篩選得到的降解紙類垃圾產高木聚糖酶和低纖維素酶目標菌100ul于CMC培養液，28℃-30℃搖床培養24小時，保存菌液。

????CMC培養液：每?100?ml?培養液含0.5g?glucose,?0.1g?NaNO3,?0.1g?K2HPO4,0.1g?KCl,?0.05g?MgSO4。

檢驗實例：

（1）以本專利所得到的菌液100ul接種在紙質添加量1%（打印紙和毛巾紙）的Dubos?鹽培養液內，30℃搖床培養7天，肉眼觀察每天紙質降解的情況，第2天能夠看到紙質的降解，第7天后看到紙質降解成肉松狀漿液；測定兩種細菌降解毛巾的效果高于濾紙降解率，最高達50%。

（2）利用DNS方法，檢測紙質的降解液離心后濾液木聚糖酶活性最高達20U/ml，而纖維素酶活性幾乎檢測不到。

本發明的有益效果:該方法操作簡單，能夠高效的找到降解紙類垃圾產高木聚糖酶和低纖維素酶細菌，利用此類菌能夠增加生物漂白后紙漿強度,提高生物漂白經濟效果。

具體實施方式

本發明提供一種從土壤中分離得到降解紙類垃圾產高木聚糖酶和低纖維素酶細菌的制備方法。

為實現以上目的，本發明提出以下技術方案：

采用選擇性培養基篩選并純化能夠降解濾紙的細菌。進行降解濾紙和毛巾紙試驗，肉眼觀察到上述紙質大量降解并進行紙質降解液纖維素酶和木聚糖酶等的檢測。其步驟如下：

??（1）野外取攙雜有大量腐爛至棕黃色或黑色木屑的土壤，置干凈塑料袋中，在自然條件下風干7天。