[發明專利]向日葵黑莖病菌的鑒定方法

有效

• 申請號: 201110397732.5
• 申請日: 2011-12-05
• 公開（公告）號: CN102747137A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 趙君;景蘭;周洪友;王玉杰;雷中華;石必顯;張之為;曹雄;娜仁
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及病菌鑒定方法，具體而言涉及一種向日葵黑莖病菌的鑒定方法。

背景技術

向日葵黑莖病(Sunflower?Phoma?black?stem)是向日葵上由種子攜帶傳播的一種重要的、毀滅性的真菌病害，也是我國的一種對外檢疫性病害。引起該病的病原菌的有性態為Leptosphaeria?lindquistii屬于子囊菌亞門小球腔菌屬，無性態為Phoma?macdonaldii屬于半知菌亞門莖點霉屬。向日葵黑莖病菌在向日葵的整個生長期都可進行侵染。該病最典型的癥狀是病斑初發生于葉柄基部，迅速向莖桿上擴展，形成黑色橢圓形病斑，引起葉片萎蔫干枯。病斑黑色有清晰邊緣，嚴重時可環繞莖桿，導致植株倒伏枯死，莖桿表面產生黑色小粒的分生孢子器，在花盤背面，產生褐色病斑，花盤干枯且小，子粒無法正常灌漿，造成嚴重減產。

在我國向日葵黑莖病是一種新病害，2008年第一次報道在新疆地區有此病害發生。2011年的調查的結果表明除新疆外，內蒙古西部巴彥淖爾市、東部的阿榮旗地區、寧夏的石嘴山地區、甘肅蘭州安寧區、山西的汾陽地區、河北的張家口地區、黑龍江甘南地區等均有不同程度的發生，重病田的發病株率高達100％。重病田對產量的損失超過60％。

發明內容

然而，在向日葵黑莖病株中可能存在其它病原菌混合侵染的現象，如果不能及時確定病原菌類型，就無法做到有針對性的進行防治。本發明的目的是提供一種向日葵黑莖病菌的快速檢測方法。為了實現本發明的目的，采用如下技術方案：

本發明一方面涉及向日葵黑莖病菌的鑒定方法，包括如下步驟：

從向日葵種子或發病植株中提取DNA；

采用引物：

F-引物CAAACTGACCATTTCTAGC(正向)；

R-引物AGGGATCCACTCGACGAAGT(反向)；

對提取的向日葵DNA進行PCR擴增，對擴增產物進行凝膠電泳，檢測凝膠電泳圖在441bp處是否有產物。

在本發明的一個優選實施方式中，在擴增產物凝膠電泳的同時還包括標記電泳條帶大小的標記物。

在本發明的一個優選實施方式中，所述的標記物是DL2000。

該方法能夠特異性的鑒定黑莖病菌。采用該方法能對向日葵種子進行帶菌檢測能夠控制此病害的遠距離的傳播；同時，對田間發病植株進行早期的快速鑒定也是控制病害擴展蔓延的重要的環節。

附圖說明：

圖1：凝膠電泳結果：M：DL2000?Marker；1：向日葵菌核病核盤菌DNA；2：向日葵黃萎病大麗輪枝菌DNA；3：向日葵黑莖病菌DNA；4：向日葵黑斑病菌鏈格孢菌DNA；CK負對照。

具體實施方式

實施例1：

首先，由于向日葵黑莖病只有新疆有報道，因此我們首先對在其他向日葵種植地區采集的病樣通過傳統的Koch’s法則結合PCR進行鑒定，確定所采集的病樣是由Phoma?macdonaldi引起的黑莖病。

合成引物：

F-引物CAAACTGACCATTTCTAGC(正向)；

R-引物AGGGATCCACTCGACGAAGT(反向)；

從向日葵種子或發病植株中提取DNA，采用合成的引物進行PCR擴增，所述的PCR采用本領域公知的步驟進行，然后對擴增產物進行凝膠電泳，如果在凝膠電泳的441bp上有顯示，如附圖1所示，則表示該向日葵種子或發病植株感染了黑莖病，該方法能夠特異性的鑒定黑莖病。采用該方法能對向日葵種子進行帶菌檢測能夠控制此病害的遠距離的傳播，對田間發病植株進行早期的快速鑒定也是控制病害擴展蔓延的重要的環節。

當理解的是，對本領域普通技術人員來說，可以根據上述說明加以改進或變換，而所有這些改進和變換都應屬于本發明所附權利要求的保護范圍。