[發明專利]百草枯半抗原、百草枯完全抗原及其制備方法

無效

• 申請號: 201110396893.2
• 申請日: 2011-12-05
• 公開（公告）號: CN103130712A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 寧保安;高志賢;劉建青;彭媛;柳明;白家磊;孫思明
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所
• 主分類號: C07D213/22
• 分類號: C07D213/22;C07D213/127;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K1/113
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1.一種百草枯半抗原，具有式I結構：

其化學名稱為N-甲基-N’-戊酸基-二吡啶二溴化物。

2.權利要求1所述百草枯半抗原的制備方法，由如下步驟組成：

(1)N-甲基-二吡啶碘化物的合成將250ml三口圓底燒瓶固定于鐵架臺，避光通氮。4，4′-二吡啶808mg溶解在8ml丙酮中，攪拌冷卻至4℃，將碘甲烷400μl滴加到上述溶液中。保持4℃攪拌。大約6h反應達到平衡。過濾，用丙酮洗滌，抽干，得黃色針狀結晶。此結晶用無水乙醇重結晶。真空干燥。

(2)N-甲基-N′-戊酸乙酯基-二吡啶碘溴化物的合成0.85mgN-甲基-二吡啶化合物溶于10ml二甲基甲酰胺(DMF)，通氮攪拌溶解，并控制溫度至120℃，緩慢滴加1.7ml?5-溴戊酸乙酯，回流4h，并同時進行TLC監控至反應物基本反應完全，停止反應。自然冷卻，室溫放置。冷卻析出紅色片狀結晶。過濾，抽干，真空干燥，得到紅色片狀結晶。

(3)N-甲基-N′-戊酸基-二吡啶二溴化物的合成500mgN-甲基-N′-戊酸乙酯基-二吡啶化合物于通氮氣四口瓶，加入40％溴氫酸水溶液18ml，混合，加熱回流1h。TLC指示反應物全部水解。停止加熱。在旋轉蒸發器上減壓蒸去過量的酸和水，保持水浴溫度不超過60℃，蒸干，得到油狀物。冷卻后，加入少量丙酮即有白色固體析出。過濾，抽干，真空干燥。

3.一種百草枯完全抗原，具有式II結構：

4.權利要求3所述百草枯完全抗原的制備方法，由如下步驟組成：

9mg百草枯半抗原溶于500ul二甲基亞砜(DMSO)，加入15ul三正丁胺，室溫攪拌5min，然后加入8ul氯甲酸異丁酯，室溫攪拌30min。將載體蛋白溶于2ml的硼酸鹽緩沖溶液中。將百草枯半抗原溶液緩慢滴入載體蛋白溶液中。4℃攪拌過夜，用PBS透析三天，每四個小時換一次透析液。

5.權利要求4所述百草枯半抗原溶于二甲基亞砜的濃度為15-20mg/mL。

6.權利要求4所述載體蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HAS)或者匙孔藍蛋白(KLH)等。