[發明專利]一種酶電極的制備及快速檢測植物油過氧化值的方法

無效

• 申請號: 201110392099.0
• 申請日: 2011-12-01
• 公開（公告）號: CN102435650A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 李書國;任媛媛;薛文通;袁濤;石亞麗
• 申請（專利權）人: 河北科技大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/416
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 王雪梅

1.一種酶電極的制備方法，其特征是，它包括以下步驟：

a.電極預處理

將玻碳電極(Glass?Carbon?Electrode)用Al₂O₃粉研磨拋光，用二次蒸餾水潤濕，接著進行超聲清洗處理，然后再用二次蒸餾水和丙酮沖洗除去其表面吸附物質，使其成鏡面；然后將玻碳電極浸入濃度為0.2mol/L的硫酸溶液中，用PAR?270電化學工作站進行循環伏安法掃描處理，掃描速度為50m?V/s，電壓范圍為-0.5～+1.5V，持續掃描10min，得到穩定的循環伏安圖后，取出玻碳電極，然后用二次蒸餾水洗凈，室溫干燥后備用；

b.辣根過氧化物酶Nafion膜修飾的玻碳電極的制備：

首先，將5％的Nafion溶液用純甲醇稀釋至0.3％，然后用微量注射器吸取2～10μl的Nafion和甲醇的混合溶液均勻地滴加到步驟a的玻碳電極的表面，然后用紅外干燥器烘干蒸發掉溶劑甲醇，在電極表面形成一薄層Nafion膜，得到Nafion膜電極；

其次，配制濃度為1×10^-4mol/L的亞甲基藍(MB)溶液，然后將Nafion膜電極浸入到亞甲基藍溶液中，保持10min，通過離子交換，將亞甲基藍固定到Nafion的膜電極內，得Nafion-亞甲基藍膜電極；

然后，采用牛血清白蛋白-戊二醛交聯方法固定辣根過氧化物酶(HRP)，配制均勻混合液10ml，所述混合液由下述物質組成：二次蒸餾水10ml、牛血清白蛋白400mg、辣根過氧化物酶5～100mg以及戊二醛156mg；準確吸取10μl的混合溶液均勻滴加到上述的Nafion-亞甲基藍膜電極表面，在室溫下放置2h，等水分蒸發后，即形成辣根過氧化物酶Nafion膜修飾電極(Nafion/MB/HRP電極)，即得本發明的酶電極，將制備好的酶電極在4℃溫度下保存備用。

2.根據權利要求1所述的酶電極的制備方法，其特征是，所述步驟b中選擇2～10μl的Nafion和甲醇的混合溶液，使酶電極的膜厚度達到1～4μm。

3.根據權利要求1所述的酶電極的制備方法，其特征是，所述步驟b中選擇辣根過氧化物酶的濃度為0.5～10mg/ml。

4.根據權利要求1所述的酶電極的制備方法，其特征是，所述PAR?270電化學工作站包括EG&G?M283型恒電位儀、恒電流儀、方正電腦及操作軟件M270電化學軟件部分。

5.使用權利要求1所述的酶電極快速檢測植物油過氧化值的方法，其特征是，它包括以下步驟：

a.標準曲線

準確稱取0.398g過氧化月桂酰標準品加入到100ml的容量瓶，用無水乙醇溶解并稀釋到刻度，其濃度為1.0×10^-2mol/L，得過氧化月桂酰溶液，避光貯存備用；

取0.5ml的0.1mol/L硫酸的水溶液和1ml的1.0mol/L的氯化鋰的乙醇溶液加入到電解池中，然后在電解池中加入0～575μl的上述過氧化月桂酰溶液，接著在電解池中加入乙醇溶液15ml，1，2二氯乙烷5ml，再加入乙腈至電解池刻度25ml，使電解池中過氧化月桂酰的濃度為0～2.3×10^-4mol/L，然后用PAR?270電化學工作站來測定權利要求1所述的酶電極的循環伏安圖，即分別記錄酶電極在空白樣和加入標準過氧化月桂酰溶液的循環伏安圖；測試條件為，掃描速度：0～0.4V，20mv/s；在空白樣和加入標準過氧化月桂酰溶液樣品中，用PAR?270電化學工作站來測定權利要求1所述的酶電極的循環伏安圖，分別進行三次測量并記錄循環伏安圖，取其測量的峰電流平均值減去空白時亞甲基蘭的還原峰電流后即為過氧化月桂酰的還原響應電流值，以過氧化月桂酰的電流響應值為縱坐標，過氧化月桂酰的濃度為橫坐標，得到過氧化月桂酰的電流響應值與其濃度之間的線性曲線，即標準曲線及線性回歸方程式，試驗過程在25±0.5℃下進行；

b.測定

取0.5～2g的植物油樣品置于25ml的電解池中，隨后加入0.40ml的0.1mol/L的乙醇硫酸溶液，1.0ml的1.0mol/L的乙醇氯化鋰溶液和5ml的1，2二氯乙烷，然后用乙腈稀釋到最終刻度25ml，攪拌并用N₂純化5～10min，用PAR?270電化學工作站來測定權利要求1所述的酶電極的循環伏安圖，分別進行三次測量并記錄循環伏安圖，取其測量的峰電流平均值減去空白時亞甲基蘭的還原峰電流后即為油樣的還原響應電流值，取其還原電流響應值的平均值作為最后油樣過氧化值的測定結果，按線性回歸方程式計算其過氧化物的摩爾濃度，再換算成植物油中的過氧化值，得到過氧化值，此過程在25±0.5℃下進行。