[發明專利]抗人γδTCR單克隆抗體的重組單鏈抗體G5?4ScFv及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201110391501.3
• 申請日: 2011-11-30
• 公開（公告）號: CN103130894B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 何維;鄭靜;郭陽;胡愉;崔蓮仙
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/21;C12N5/0783
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司11322
• 代理人: 魯兵

1.一種抗人γδTCR單克隆抗體的重組單鏈抗體，其重鏈可變區具有序列表中的SEQ?ID?No：1的氨基酸殘基序列，輕鏈可變區具有序列表中的SEQ?ID?No：2的氨基酸殘基序列。

2.根據權利要求1所述的抗人γδTCR單克隆抗體的重組單鏈抗體，其特征在于：所述重鏈可變區和輕鏈可變區通過柔性連接肽連接，所述柔性連接肽的氨基酸殘基序列的通式為(Gly₄Ser)n，n為1-5的整數，優選為3，其中n為3時的重組單鏈抗體的氨基酸殘基序列如序列表中序列5所示。

3.編碼權利要求1或2所述重組單鏈抗體的基因。

4.根據權利要求3所述的基因，其特征在于：所述重鏈可變區編碼基因具有序列表中SEQ?ID?No：3的DNA序列或編碼序列表中SEQ?ID?No：1的DNA序列或在高嚴謹條件下可與序列表中SEQ?ID?No：3限定的DNA序列雜交的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中SEQ?ID?No：3限定的DNA序列雜交的核苷酸序列，其輕鏈可變區編碼基因具有序列表中SEQ?ID?No：4的DNA序列或編碼序列表中SEQ?ID?No：2的DNA序列或在高嚴謹條件下可與序列表中SEQ?ID?No：4限定的DNA序列雜交的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中SEQ?ID?No：4限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。

5.根據權利要求3所述的基因，其特征在于：編碼所述具有(Gly₄Ser)₃柔性連接肽的重組單鏈抗體的基因的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No：6所示。

6.含有權利要求3或4或5所述基因的表達載體、轉基因細胞系和宿主菌；具體包括保藏號CGMCC?No.4983的重組單鏈抗體G5-4ScFv的表達工程菌G5-4SCFV-PET22b(+)-sp-transB和保藏號CGMCC?No.4984的重組G5-4ScFv蛋白的表達工程菌G5-4SCFV-PET22b(+)-transB。

7.一種表達權利要求1所述抗人γδTCR單克隆抗體重組單鏈抗體的方法，是將權利要求3所述基因插入表達載體中，再將構建的重組表達載體導入宿主細胞，經表達、純化得到高活性的抗人γδTCR單克隆抗體重組單鏈抗體。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述重組表達載體具體為將所述重組單鏈抗體G5-4ScFv基因插入pET-22b(+)的多克隆位點得到的重組表達載體G5-4ScFv-PET22b(+)-sp和G5-4ScFv-PET22b(+)；轉化有G5-4ScFv-PET22b(+)-sp或G5-4ScFv-PET22b(+)的重組大腸桿菌分別為G5-4SCFV-PET22b(+)-sp-transB或G5-4SCFV-PET22b(+)-transB；在大腸桿菌宿主細胞進行表達時需加入IPTG誘導劑，所加入IPTG的濃度為200μmol/L，誘導溫度為16-37℃，優選為20℃。

9.權利要求1或2所述的抗人γδTCR單克隆抗體的重組單鏈抗體在制備擴增γδT細胞制劑中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：具體方法為：用5μg/mL的重組單鏈抗體G5-4ScFv包被培養板，加入2×10⁶個新鮮分離的人PBMC，用含IL-2(200U/mL)的RP1640完全培養基培養2周，得到純度較高的γδT細胞。